外源性硫化氢对烧伤大鼠体内miRNA-455水平影响的研究

发布时间：2021-07-06 01:59

　　目的:探讨外源性硫化氢（H2S）是否可以调节烧伤血清干预下大鼠表皮细胞中miRNA-455含量及烧伤大鼠血清细胞中miRNA-455含量。方法:将大鼠及大鼠表皮细胞作为研究对象。动物层次:选取体重在350-400g之间雄性SD大鼠20只。将其随机分为3组:正常对照组、烧伤组、烧伤+Na HS组。其中烧伤组、烧伤+Na HS组经麻醉后背部制作烧伤面积为30%的III°烧伤模型。烧伤+Na HS组,分别于烧伤后1d、2d于腹腔注射56μmol/L的Na HS溶液0.4ml/100g。正常对照组、烧伤组、烧伤+Na HS组相同条件饲养,并于烧伤2d、3d后,腹主动脉采血,制备血清,提取各组血清中miRNA采用q PCR方法检测各组中miRNA-455含量。细胞层次:大鼠表皮细胞随机分为3组:正常组、烧伤血清组、烧伤血清+Na HS组。3组细胞同步化培养后,将3组细胞分别接种至6孔板中培养,正常组继续使用胎牛血清培养,烧伤血清组、烧伤血清+Na HS组,则使用10%烧伤大鼠血清培养基干预4h。在烧伤血清+Na HS组用浓度为150μmol/L的Na HS溶液分别干预1、4、24h后。提取各组表... 

【文章来源】：青海大学青海省 211工程院校

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【学位级别】：硕士

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扩增曲线（扩增前期原料和酶丰富的情况下，产物呈对数增长，随着原料耗竭和酶失活，扩增曲线达到平台期，产物不再生成，曲线平滑）

青海大学硕士学位论文第二章材料与方法12融解分析模式：融解曲线95℃60秒钟(RampRate4.4℃/秒)55℃30秒钟(RampRate2.2℃/秒)95℃30秒钟(RampRate0.11℃/秒，AcquisitionMode:Continuous，Acquisitions:5per℃)1cycle降温50℃30秒钟(RampRate2.2℃/秒)1cycle检测结束后查看溶解曲线、扩增曲线，根据所得的Ct值按公式计算出各组的目的基因的相对表达量2-ΔΔCt。图2.1扩增曲线（扩增前期原料和酶丰富的情况下，产物呈对数增长，随着原料耗竭和酶失活，扩增曲线达到平台期，产物不再生成，曲线平滑）图2.2溶解曲线（扩增产物的溶解曲线为单一峰，没有杂峰，产物的特异性强，无非特异扩增，没有引物二聚体存在）

青海大学硕士学位论文第二章材料与方法15图2.3.2miRNA-455靶基因编码蛋白网络相互作用图因为本实验主要目的为验证外源性硫化氢与烧伤大鼠体内miRNA-455含量变化关系，靶基因预测的相关部分，只是为后续可能的科研工作提供思路。故粗略筛选出在大鼠体内与miRNA-455相关性较大数各基因，具体的各基因功能在此省略。后续具体及更为详细的工作需在进行后续可能的课题中进行大量详细的继续探索。2.9统计学分析本实验数据为计量资料，用均数±标准差（x±s）描述，使用SPSS软件22.0进行统计学处理，所选统计学方法为独立样本t检验（ttest），选取α=0.05作为检验水准。


本文编号：3267287