小剂量超短波联合人脐带间充质干细胞移植治疗对大鼠脊髓损伤周围星型胶质细胞影响的实验研究
发布时间：2021-07-05 23:48
目的:1.研究小剂量超短波治疗对脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后早期A1型星形胶质细胞分化的影响。2.小剂量超短波治疗联合人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）移植对脊髓损伤后大鼠损伤周围星形胶质细胞的影响方法:1.将60只SD大鼠随机分成3组:假手术组（n=4）,对照组（n=28）,干预组（n=28）,假手术组仅暴露T10脊髓但不给予打击;对照组,暴露T10节段脊髓后给予Allen’s打击制备SCI模型,并不给予任何治疗;干预组,给予Allen’s打击致SCI,并在损伤后24h开始给予小剂量超短波（ultra shortwave,USW）治疗,每日1次,每周5次,每次7min,直至取材前。SCI大鼠运动功能用Basso Beattie Bresnahan（BBB）评分进行评价,SCI大鼠取材后分别对受损脊髓组织进行固定、脱水沉糖、冰冻纵向切片,使用免疫荧光法检测A1型星形胶质细胞数、小胶质细胞数、IBA-1/P65+细胞数及P65入核细胞数。2.将90...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脊髓损伤大鼠造模示意图（A-B）脊髓损伤模型打击过（C）
中国医科大学硕士学位论文42.2.2小剂量USW治疗SCI术后第1天，给予干预组大鼠每天1次，每周5d的小剂量超短波干预，具体方法如下：每次治疗前，先打开小功率USW治疗仪。以损伤区域为基准，将2号电极（直径为4cm）对置放于受损脊髓两侧，电极与大鼠皮肤保持2cm间隙（上海产五官超短波治疗仪，功率为14W，波长7.37m,实际输出功率约11W，每天7min）。2.2.3大鼠后肢的运动功能观察为了保证实验的稳定性，所有SCI大鼠在造模前及造模后1d、3d、5d、7d，14d进行BBB运动功能行为学评估。BBB评分完全瘫痪的大鼠为0分，正常大鼠21分，SCI大鼠的功能情况介于两者之间，每1只入组的大鼠观察4min。图1脊髓损伤大鼠造模示意图（A-B）脊髓损伤模型打击过（C）大鼠脊髓损伤后损伤区域图2脊髓损伤大鼠小剂量USW治疗(A)与行为学分析（B）（B）BBB行为学观察
中国医科大学硕士学位论文63结果3.1SCI早期大鼠运动功能评分对于BBB评分，所有的大鼠在造模前及假手术大鼠在术后苏醒均为21分。造模后1d对照组、干预组BBB评分均处于0分，这证实SCI大鼠打击模型建立的成功。随着时间推移，对照组、干预组大鼠BBB评分逐渐上升，这代表SCI大鼠运动在不加任何干预的情况也可以恢复一部分；对照组、干预组自第3d起两条曲线在逐渐向上的过程中，在同一时间点相比，干预组数值高于对照组，这代表从数值上看，干预组恢复程度快与对照组（图2A）。大鼠SCI后14d时BBB评分，干预组高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01），这代表干预组SCI大鼠相比对照组表现出更好的运动功能恢复（图3）。3.2IBA-1/P65免疫荧光IBA-1是小胶质细胞的特异性标志物，在假手术组脊髓组织当中，小胶质细胞呈现长梭状。SCI后，小胶质细胞及浸润的巨噬细胞共同发挥免疫作用，吞噬过细胞的巨噬细胞呈现大而圆的多核状。荧光显微镜下观察发现，SCI后对照组、干预组1-3d时脊髓组织周围小胶质细胞数量快速升高，SCI后1d两组间浸润细胞的巨噬细胞数量无明显差异(p=0.4848)。SCI后3-7d两组小胶质细胞数量处于缓慢上升图3SCI后各组运动功能恢复情况(A)SCI后早期组BBB行为学评分(B)SCI后14d时两组BBB行为学评分**P<0.01
本文编号：3267076
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脊髓损伤大鼠造模示意图（A-B）脊髓损伤模型打击过（C）
中国医科大学硕士学位论文42.2.2小剂量USW治疗SCI术后第1天，给予干预组大鼠每天1次，每周5d的小剂量超短波干预，具体方法如下：每次治疗前，先打开小功率USW治疗仪。以损伤区域为基准，将2号电极（直径为4cm）对置放于受损脊髓两侧，电极与大鼠皮肤保持2cm间隙（上海产五官超短波治疗仪，功率为14W，波长7.37m,实际输出功率约11W，每天7min）。2.2.3大鼠后肢的运动功能观察为了保证实验的稳定性，所有SCI大鼠在造模前及造模后1d、3d、5d、7d，14d进行BBB运动功能行为学评估。BBB评分完全瘫痪的大鼠为0分，正常大鼠21分，SCI大鼠的功能情况介于两者之间，每1只入组的大鼠观察4min。图1脊髓损伤大鼠造模示意图（A-B）脊髓损伤模型打击过（C）大鼠脊髓损伤后损伤区域图2脊髓损伤大鼠小剂量USW治疗(A)与行为学分析（B）（B）BBB行为学观察
中国医科大学硕士学位论文63结果3.1SCI早期大鼠运动功能评分对于BBB评分，所有的大鼠在造模前及假手术大鼠在术后苏醒均为21分。造模后1d对照组、干预组BBB评分均处于0分，这证实SCI大鼠打击模型建立的成功。随着时间推移，对照组、干预组大鼠BBB评分逐渐上升，这代表SCI大鼠运动在不加任何干预的情况也可以恢复一部分；对照组、干预组自第3d起两条曲线在逐渐向上的过程中，在同一时间点相比，干预组数值高于对照组，这代表从数值上看，干预组恢复程度快与对照组（图2A）。大鼠SCI后14d时BBB评分，干预组高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01），这代表干预组SCI大鼠相比对照组表现出更好的运动功能恢复（图3）。3.2IBA-1/P65免疫荧光IBA-1是小胶质细胞的特异性标志物，在假手术组脊髓组织当中，小胶质细胞呈现长梭状。SCI后，小胶质细胞及浸润的巨噬细胞共同发挥免疫作用，吞噬过细胞的巨噬细胞呈现大而圆的多核状。荧光显微镜下观察发现，SCI后对照组、干预组1-3d时脊髓组织周围小胶质细胞数量快速升高，SCI后1d两组间浸润细胞的巨噬细胞数量无明显差异(p=0.4848)。SCI后3-7d两组小胶质细胞数量处于缓慢上升图3SCI后各组运动功能恢复情况(A)SCI后早期组BBB行为学评分(B)SCI后14d时两组BBB行为学评分**P<0.01
本文编号：3267076
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