全麻药物对培养大鼠皮层星形胶质细胞兴奋性和递质释放的影响

发布时间：2017-04-25 18:13

  本文关键词：全麻药物对培养大鼠皮层星形胶质细胞兴奋性和递质释放的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的:星形胶质细胞已被证明在兴奋后可释放出多种神经递质至突触间隙,并作用于突触前膜及突触后膜,这些由星形胶质细胞释放出的神经递质被称为胶质递质。因此,星形胶质细胞被认为是中枢神经系统(the central nervous system,CNS)突触信息传递及调控过程的重要组成部分。本实验旨在探究全身麻醉药物对皮层星形胶质细胞的作用,观察全身麻醉药物对星形胶质细胞钙瞬变(Calcium transients)及胶质递质释放的影响,分析其可能作用机制,为全麻机制研究提供新思路。方法:培养并纯化大鼠皮层星形胶质细胞,免疫荧光染色技术观察胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达,鉴定星形胶质细胞纯度;反射荧光成像系统(reflected fluorescence system)动态观察全身麻醉药物丙泊酚(propofol)、氯胺酮(Ketamine,Ket)以及右旋美托咪啶(dexmedtomidine,Dex)对二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱发星形胶质细胞胞内钙瞬变的影响;应用ELISA法检测胞内三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)的水平变化;应用液相色谱技术,观察全麻药物作用下皮层星形胶质细胞释放谷氨酸(glutatmate,Glu),γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA),丝氨酸(Serine,Ser)的情况;最后使用M型乙酰胆碱受体受体(muscarinic type acetylcholine receptor)阻断剂与N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-asparate,NMDA)受体阻断剂,明确全麻药物对星形胶质细胞作用的靶点受体。结果:1.免疫荧光染色鉴定所培养皮层星形胶质细胞纯度大于90%;2.100 n M~100μM ADP均可诱发培养的皮层星形胶质细胞[Ca2+]i升高,即钙瞬变,且呈浓度依赖趋势。其中100 n M ADP可诱发[Ca2+]i的轻度上升,但不具有统计学意义,而1μM、10μM、100μM的ADP则能诱发出显著的[Ca2+]i上升,且差异显著(P0.01),经测算ADP激活培养星形胶质细胞的半数有效浓度为208.04±14.94 n M;3.Ket可呈浓度依赖性抑制10μM ADP诱发的星形胶质细胞钙瞬变,且半抑制浓度值为236.23±3.62μM;而Propofol(100μM)和Dex(50μM、100μM)未能对10μM ADP诱导产生的星形胶质细胞钙瞬变产生明显影响(P0.05);4.1μM ADP可显著提升星形胶质细胞内IP3水平(P0.01);然而Ket、M型乙酰胆碱受体阻断剂阿托品(Atropine)和NMDA受体阻断剂(AP5)均对10μM ADP作用下星形胶质细胞内IP3水平没有影响(P0.05);5.Ket并不影响ADP作用下星形胶质细胞Glu,Ser的释放水平(P0.05)。结论:1.Ket,Propofol,Dex三种麻醉药物中,仅有Ket可以有效抑制ADP诱发的星形胶质细胞钙瞬变,且呈浓度依赖趋势;2.ADP的应用可以显著提升星形胶质细胞内IP3水平;3.细胞内IP3途径可能没有参与Ket抑制ADP诱发星形胶质细胞钙瞬变的作用机制;4.Ket抑制ADP诱发星形胶质细胞钙瞬变并不能有效影响Glu,和Ser的释放。
【关键词】：全身麻醉 星形胶质细胞 钙瞬变 氯胺酮 谷氨酸
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 中英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-19
• 结果19-32
• 讨论32-37
• 本实验的不足和可深化之处37-38
• 结论38-39
• 参考文献39-45
• 综述45-54
• 参考文献50-54
• 致谢54-55
• 作者简介55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 傅艳妮;刘玲;何波;郭明炎;刘安民;曹铭辉;;氯胺酮对原代培养星形胶质细胞缝隙连接的影响[J];中华实验外科杂志;2015年11期

2 李烨;张家骅;吴建云;;大脑皮质星形胶质细胞的培养和鉴定[J];动物医学进展;2010年04期

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本文编号：326818