三七皂苷R1对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞Wnt/β-catenin信号转导通路的作用机制研究

发布时间：2021-07-16 14:35

　　[目的]三七皂苷R1是五加科多年生草本植物三七的特征性成分。前期研究显示三七皂苷R1可诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,具体作用机制不清[1]。本文通过不同浓度(20μg/ml-200μg/ml 三七皂苷R1对体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞进行干预,观察三七皂苷R1对体外瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响,筛选最佳浓度为 120μg/ml,作用 48 小时后,观察 Wnt5a、β-catenin、GSK-3β、β-GSK-3β蛋白及mRNA水平的变化。探讨三七皂苷R1诱导人瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的分子机制及Wnt/β-catenin信号转导通路的作用,为临床防治瘢痕疙瘩提供分子及病理学水平的理论依据。[方法]收集人瘢痕疙瘩组织（keloid,K）及正常皮肤组织（nomal skin,NS）,应用组织块法分离原代培养成纤维细胞（fibroblastcell,FC）,进行成纤维细胞鉴定及绘制生长曲线,用不同浓度（20μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml、90μg/ml、100μg/ml、110μg/ml、120μg/ml、130μg/ml、140μg... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１瘢痕疙瘩图片??瘢痕疙瘩组织病理以成纤维细胞过度增殖、毛细血管及胶原增生、排列紊??

含有Ｔ细胞因子（Ｔ?ｃｅｌｌ?ｆａｃｔｏｒ，?ＴＣＦ）家族转录因子结合位点，与转录活化因子结合??后，激活下游靶基因的转录发挥作用??经典的Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号转导通路（见图２）主要在细胞增殖、迁移和凋亡??等过程起重要作用［１１］。大量研究发现：Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ在经典的Ｗｎｔ信号转导通路中起??着开关调节的决定性作用，是关键的信号传递分子。具体分子机制为：当胞外没??有Ｗｎｔ信号时，胞质内少量的ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ与不同分子组成复合物，包括轴蛋白（ａｘｉｎ）、??酪蛋白激酶ｌ（ｃａｓｅｉｎ?ｋｉｎａｓｅ?１，?ＣＫ１）、肠腺瘤息肉蛋白（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ?ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ?ｃｏｌｉ??ｇｅｎｅ，?ＡＰＣ）和糖原合成激酶３（ｇｌｙｃｏｇｅｎ?ｓｙｎｔｈａｓｅ?ｋｉｎａｓｅ?３，?ＧＳＫ３）。Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ的Ｓｅｒ４５??残基被ＣＫｌａ磷酸化，促进Ｓｅｒ３３?／?Ｓｅｒ３７、Ｔｈｒ４１残基被ＧＳＫ－３Ｐ磷酸化，进而被??ｐ－ＴｒＣＰ识别泛素化并最终降解，Ａｘｉｎ可以增强这种作用。在此状态下，Ｔ细胞因??子?／?淋巴增强因子（Ｔ?ｃｅｌｌ?ｆａｃｔｏｒ?／?ｌｙｍｐｈｏｉｄ?ｅｎｈａｎｃｉｎｇ?ｆａｃｔｏｒ，?ＴＣＦ?／?ＬＥＦ）和组蛋白??乙酰酶（ｈｉｓｔｏｎｅ?ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ

??三七皂苷Ｒ１是三七的特征性成分，分子式为Ｃ４７Ｈ８０ＯＩ８，分子量９３３．１３１??（见图３）。研究证实其可诱导人白血病细胞株ＨＬ－６（Ｐ】、ＨｅＬａ细胞１２１］凋亡，??抗肝、肾纤维化［１９ｉ。有研究证明三七皂苷Ｒ１可降低ＮＭＤＡ诱导的肝纤维化??大鼠肝组织及血清中的ＴＧＦ－ｐｉ／Ｓｍａｄ３的表达，从而发挥了抑制肝纤维化的作??用［２（）］。瘢痕疙瘩主要以成纤维细胞过度增殖、细胞外基质过度沉积所致，成纤??维细胞是瘢痕疙瘩发生发展的核心细胞，如果能诱导成纤维细胞凋亡，将为瘢痕??疙瘩的治疗带来希望。Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号转导通路在细胞增殖和凋亡中扮演重要??角色，三七皂苷Ｒ１是否能诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡？在诱导细胞凋亡的过??程中是否通过千预Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号转导通路来实现？??ｏ＾〇Ｈ??ｏ－Ｖ＾ｏｈ??％０Ｈ??图３三七皂苷Ｒ１的分子结构??本研究将探讨三七阜音Ｒ１对Ｗｎｔ／（３－ｃａｔｅｎｉｎ信号转导通路的影响。通过体??外分离培养正常皮肤成纤维细胞及瘢痕疙瘩成纤维细胞，用不同浓度三七皂苷??Ｒ１干预，观察三七皂苷Ｒ１对人瘢痕疙瘩（ｋｅｌｏｉｄ）成纤维细胞Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信??号通路中多个相关信号蛋白分子活化的变化情况，以及对细胞增殖、凋亡的影响。??１４??

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3287199