右美托咪定通过降低NLRC5的表达抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的侵袭、迁移和炎症反应

发布时间：2021-07-30 02:14

　　类风湿关节炎是一种以关节滑膜为主要靶组织的慢性、系统性、炎症性及自身免疫功能障碍性疾病。其典型的病理变化是滑膜异常增生以及关节软骨和骨质的破坏,后期可以导致关节畸形,对病人的身体和心理造成严重损害。其病因尚不明确。国内成年人发病率约为0.34%,其中女性患者数量高于男性。目前研究认为成纤维样滑膜细胞在类风湿关节炎的炎性反应和关节损伤方面起着非常重要的作用。右美托咪定是临床常用的静脉辅助镇静药,其不仅具有镇静作用,研究表明其还具有抗炎和抗癌细胞侵袭、迁移的作用。本实验中在动物模型中使用完全弗氏佐剂模拟类风湿关节炎模型;提取类风湿关节炎病人膝关节成纤维样滑膜细胞,使用TNF-α刺激细胞。探索右美托咪定对佐剂诱导关节炎大鼠的作用,以及对TNF-α刺激的成纤维样滑膜细胞的作用。实验方法:在动物实验中,把56只SD雌性大鼠随机分为8组,每组7只,分别为正常组、完全弗式佐剂组、右美托咪定+完全弗式佐剂治疗组（5μg/Kg、10μg/Kg、20μg/Kg）、单独右美托咪定处理组（5μg/Kg、10μg/Kg、20μg/Kg）。对大鼠足趾体积、血清中炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-1... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

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右美托咪定对佐剂诱导关节炎大鼠模型具有保护作用

安徽医科大学硕士学位论文20图2.右美托咪定抑制佐剂诱导关节炎大鼠滑膜组织中IL-6、IL-1β、MMP-3、MMP-9蛋白和基因的表达。（A）使用蛋白免疫印迹法分析大鼠滑膜组织中IL-6，IL-1β，MMP-3和MMP-9的水平。（B）通过RT-qPCR检测大鼠滑膜组织中IL-6，IL-1β，MMP-3和MMP-9的水平。所有值均表示为平均值±S.D。CFA，完全弗氏佐剂；DEX，右美托咪定；AA，佐剂性关节炎；Con，对照组；*对照组VS模型组；＃模型组VSDEX治疗组；**P<0.01，＃P<0.05和##P<0.01。Fig.2.DEXinhibitstheexpressionofIL-1β,IL-6,MMP-3,andMMP-9inthesynovialtissueofAArats.(A)ThelevelsofIL-6,IL-1β,MMP-3andMMP-9inratsynovialtissueswereanalyzedusingWesternblots.(B)ThelevelsofIL-6,IL-1β,MMP-3andMMP-9inratsynovialtissuesweredetectedbyRT-qPCR.Allvaluesareexpressedasthemean±S.D.CFA,completeFreund’sadjuvant;DEX,dexmedetomidine;AA,adjuvant-inducedarthritis;Con,controlgroup;*controlgroupVSmodelgroup;#modelgroupVSDEXtreatmentgroup;**P<0.01,#P<0.05,and##P<0.01.3.3右美托咪定抑制了TNF-α刺激的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLSs）的侵袭、迁移和炎症反应为了检测右美托咪定是否可以抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的炎症反应、侵袭和迁移，我们首先用右美托咪定预处理细胞1小时，然后加入TNF-α（10ng/ml）刺激24小时，收集细胞并提取细胞中的蛋白和RNA。在transwell实验中，我们先使用右美托咪定预处理细胞1小时，然后再加入TNF-α刺激48小时后对细胞进行处理和观察。在所有实验之前，我们对分离出来的细胞进行了波形蛋白免疫荧光染色。从细胞免疫荧光可以看出细胞形态为长梭形，细胞核位于细胞中央，全细胞有波形蛋白表达，证明我们分离出

安徽医科大学硕士学位论文22图3.右美托咪定抑制了TNF-α刺激的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLSs）的侵袭、迁移和炎症反应。（A）通过细胞免疫荧光检测波形蛋白的表达，并确定细胞为RA-FLS。（B）通过RT-qPCR分析DEX对IL-1β，IL-6，MMP-3和MMP-9的mRNA水平的影响。（C）用不同浓度的DEX（62.5nM，125nM，250nM，500nM和1μM）处理RA-FLS24、48和72小时。通过MTT分析了DEX对RA-FLSs活性的影响。（D）通过蛋白免疫印迹检测DEX对RA-FLS中IL-1β，IL-6，MMP-3和MMP-9蛋白水平的影响。（E）使用Transwell测定法检测DEX对RA-FLS的侵袭和迁移的影响。所有值均表示为平均值±S.D。DEX，右美托咪定；RA-FLS，类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞；Con，对照组；*对照组VSTNF-α刺激组；＃TNF-α刺激组VSDEX治疗组；＆对照组VSDEX（500nM）单独治疗组。*P<0.05，**P<0.01，＃P<0.05，##P<0.01,&P<0.05。Fig.3.DEXattenuatesinvasion,migrationandinflammationofRA-FLSsstimulatedbyTNF-α.(A)Vimentinexpressionwasdetectedbycellularimmunofluorescence,andthecellsweredeterminedtobeRA-FLSs.(B)EffectsofDEXonthemRNAlevelsofIL-1β,IL-6,MMP-3andMMP-9wereanalyzedbyRT-qPCR.(C)RA-FLSsweretreatedwithdifferentconcentrationsofDEX(62.5nM,125nM,250nM,500nM,and1μM)for24,48,and72hours.TheeffectofDEXonRA-FLSsactivitywasanalyzedbyMTT.(D)EffectsofDEXontheproteinlevelsofIL-1β,IL-6,MMP-3andMMP-9inRA-FLSsweredetectedbyWesternblot.(E)TranswellassayswereusedtodetecttheimpactofDEXontheinvasionandmigrationofRA-FLSs.Allvaluesareexpressedasthemean±S.D.DEX,dexmedetomidine;RA-FLSs,rheumatoidarthritisfibroblast-likesynoviocytes;Con,controlgr

【参考文献】：
期刊论文
[1]右美托咪啶预处理对脓毒症肾损伤大鼠炎性因子和氧化应激的影响[J]. 陈裕洁,龚楚链,谭芳,周少丽.  南方医科大学学报. 2015(10)



本文编号：3310476