手术激活外周骨髓源性抑制细胞易化荷瘤小鼠术后认知功能障碍
发布时间：2021-08-03 13:11
背景:术后认知功能障碍（POCD）是指病人在麻醉手术后其认知功能出现了明显的破坏,可严重影响患者的生活质量甚至会发展为不可逆的认知损伤。肿瘤发病率逐年增加,需要手术治疗的肿瘤病人也日益增多。中枢炎症被认为是POCD的主要发病原因;同时,肿瘤与炎症的关系密切复杂。那么,肿瘤是否影响患者POCD的发生,其机制如何?这些问题尚不清楚。目的:明确荷瘤小鼠与正常小鼠相比,是否更容易发生POCD。探讨其机制是否与手术激活肿瘤募集在外周血和脾脏中的骨髓源性抑制细胞（MDSCs）进而分泌大量炎症因子造成中枢炎症有关。通过本研究,为荷瘤个体POCD的防治提供靶点,为POCD的发病机制研究提供新的思路。方法:第一部分:将2月龄成年雄性C57/B6（23-25g）小鼠随机分为对照组、手术组、肿瘤组及肿瘤+手术组。在小鼠右侧腋下接种小鼠来源的MC38或LLC肿瘤细胞悬液构建肿瘤模型。待肿瘤直径达0.8-1.0cm,需手术的两组小鼠在氟芬合剂麻醉下行胫骨骨折内固定手术。应用Morris水迷宫和新物体识别实验检测小鼠术后学习记忆能力。使用Western blot检测海马内PSD-95蛋白相对表达水平。第二部分:选...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
实验模型的建立
上海交通大学医学院2016级硕士毕业论文-26-验第5天，肿瘤+手术组小鼠找到水下平台所用的时间（逃避潜伏期）明显长于对照组（图2C，P<0.05）。空间探索实验阶段，平台撤掉后，对照组小鼠（P<0.01）、手术组小鼠（P<0.05）和肿瘤组小鼠（P<0.05）都在目标象限花费更多时间寻找记忆中的平台位置，而肿瘤+手术组小鼠（P>0.05）在时间的象限分布上没有明显的趋向性(图2D&E)。这一现象说明，在经历了5天的定位航行训练后，肿瘤+手术组小鼠未能对水下平台的空间位置形成很好的记忆，而其他组小鼠都已对平台的空间位置形成了很好的记忆。图2：MC38细胞系荷瘤模型中，水迷宫实验证明荷瘤小鼠手术后空间参考记忆能力降低。Figure2:Morriswatermaze(MWM)behavioraltestindicatesimpairedreferencememoryaftersurgeryinMC38tumor-bearingmice.A.Morris水迷宫时间轴线。B.各组小鼠的游泳速度无显著差异具有可比性。C.定位航行实验第5天（day5），肿瘤+手术组小鼠平均逃避潜伏期长于对照组小鼠，手术组和肿瘤组与对照组相比无显著差异。D.空间探索实验阶段（day6），各组小鼠在各个象限的游泳时间分布。对照组、单纯手术组和肿瘤组小鼠在第3象限（目标象限）的游泳时间明显长于其他象限，
上海交通大学医学院2016级硕士毕业论文-27-然而肿瘤+手术组小鼠4个象限的时间分布没有明显的差异（对目标象限无显著趋向性）。E.各组小鼠在空间探索实验阶段有代表性的运动轨迹。TQ：目标象限。图中数值用均数±标准误（x±sem）表示。B-D，Naiven=12，Surgeryn=11，Tumorn=8，Tumor+Surgeryn=12。图C中，*表示与对照组（Naive）相比，P<0.05。图D中，*和**分别表示与第1象限（相反象限）相比，P<0.05和P<0.01。接着，我们使用新物体识别实验（NOR）评估MC38细胞系荷瘤模型下各组小鼠胫骨骨折手术后物体识别记忆的情况。NOR时间轴线如图3A所示。识别系数是指在测试阶段，小鼠探索新物体所花费的时间占探索新旧物体时间总和的百分比。识别系数代表了小鼠识别、分辨新物体的能力。如图3B，测试阶段小鼠探索新旧物体总时间在各组之间没有显著差异（P>0.05），证明各组小鼠探索事物的基本能力处于同一水平。有趣的是，如图3C所示，对照组、单纯手术组和肿瘤组小鼠都表现出对新奇事物的趋向性（花费更多时间接触探索新物体），而肿瘤+手术组小鼠却没有表现出对新物体的偏爱性（探索新旧物体的时间几乎相等）（P<0.05）。这一现象提示，在模型中，胫骨骨折手术可损伤MC38细胞系荷瘤小鼠的物体识别记忆。使用MC38细胞系荷瘤小鼠，两种海马依赖性的行为学实验结果均提示，相比于普通成年小鼠，胫骨骨折手术更容易使同龄荷瘤小鼠发生POCD。图3:MC38细胞系荷瘤模型中，新物体识别实验（NOR）提示荷瘤小鼠手术后物体识别记忆能力降低。
【参考文献】：
期刊论文
[1]突触后致密蛋白95（PSD95）和突触小泡蛋白在神经元成熟过程中的分布[J]. 柴继侠,王元元,李徽徽,贺文欣,邹维艳,周艳梅,胡小冬,柴强. 细胞与分子免疫学杂志. 2016(12)
本文编号：3319679
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
实验模型的建立
上海交通大学医学院2016级硕士毕业论文-26-验第5天，肿瘤+手术组小鼠找到水下平台所用的时间（逃避潜伏期）明显长于对照组（图2C，P<0.05）。空间探索实验阶段，平台撤掉后，对照组小鼠（P<0.01）、手术组小鼠（P<0.05）和肿瘤组小鼠（P<0.05）都在目标象限花费更多时间寻找记忆中的平台位置，而肿瘤+手术组小鼠（P>0.05）在时间的象限分布上没有明显的趋向性(图2D&E)。这一现象说明，在经历了5天的定位航行训练后，肿瘤+手术组小鼠未能对水下平台的空间位置形成很好的记忆，而其他组小鼠都已对平台的空间位置形成了很好的记忆。图2：MC38细胞系荷瘤模型中，水迷宫实验证明荷瘤小鼠手术后空间参考记忆能力降低。Figure2:Morriswatermaze(MWM)behavioraltestindicatesimpairedreferencememoryaftersurgeryinMC38tumor-bearingmice.A.Morris水迷宫时间轴线。B.各组小鼠的游泳速度无显著差异具有可比性。C.定位航行实验第5天（day5），肿瘤+手术组小鼠平均逃避潜伏期长于对照组小鼠，手术组和肿瘤组与对照组相比无显著差异。D.空间探索实验阶段（day6），各组小鼠在各个象限的游泳时间分布。对照组、单纯手术组和肿瘤组小鼠在第3象限（目标象限）的游泳时间明显长于其他象限，
上海交通大学医学院2016级硕士毕业论文-27-然而肿瘤+手术组小鼠4个象限的时间分布没有明显的差异（对目标象限无显著趋向性）。E.各组小鼠在空间探索实验阶段有代表性的运动轨迹。TQ：目标象限。图中数值用均数±标准误（x±sem）表示。B-D，Naiven=12，Surgeryn=11，Tumorn=8，Tumor+Surgeryn=12。图C中，*表示与对照组（Naive）相比，P<0.05。图D中，*和**分别表示与第1象限（相反象限）相比，P<0.05和P<0.01。接着，我们使用新物体识别实验（NOR）评估MC38细胞系荷瘤模型下各组小鼠胫骨骨折手术后物体识别记忆的情况。NOR时间轴线如图3A所示。识别系数是指在测试阶段，小鼠探索新物体所花费的时间占探索新旧物体时间总和的百分比。识别系数代表了小鼠识别、分辨新物体的能力。如图3B，测试阶段小鼠探索新旧物体总时间在各组之间没有显著差异（P>0.05），证明各组小鼠探索事物的基本能力处于同一水平。有趣的是，如图3C所示，对照组、单纯手术组和肿瘤组小鼠都表现出对新奇事物的趋向性（花费更多时间接触探索新物体），而肿瘤+手术组小鼠却没有表现出对新物体的偏爱性（探索新旧物体的时间几乎相等）（P<0.05）。这一现象提示，在模型中，胫骨骨折手术可损伤MC38细胞系荷瘤小鼠的物体识别记忆。使用MC38细胞系荷瘤小鼠，两种海马依赖性的行为学实验结果均提示，相比于普通成年小鼠，胫骨骨折手术更容易使同龄荷瘤小鼠发生POCD。图3:MC38细胞系荷瘤模型中，新物体识别实验（NOR）提示荷瘤小鼠手术后物体识别记忆能力降低。
【参考文献】：
期刊论文
[1]突触后致密蛋白95（PSD95）和突触小泡蛋白在神经元成熟过程中的分布[J]. 柴继侠,王元元,李徽徽,贺文欣,邹维艳,周艳梅,胡小冬,柴强. 细胞与分子免疫学杂志. 2016(12)
本文编号：3319679
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