CRLF1激活ERK1/2信号通路调控TGF-β1介导的黄韧带肥厚的机制研究
发布时间：2021-08-05 04:51
背景黄韧带肥厚是腰椎椎管狭窄的一个重要因素,严重时会压迫神经根和马尾,导致腰部疼痛及间歇性跛行。尽管有研究认为黄韧带肥厚可能和各种炎症因子、生长因子、老龄及机械应力有关,但是导致黄韧带肥厚的关键分子及其调控机制仍然未知。另外,由于缺乏有效的黄韧带肥厚动物模型,尚未发现关于黄韧带肥厚分子机制的体内研究。目的本研究旨在:1.发现黄韧带肥厚的关键调控蛋白,探索其调控细胞外基质形成的机制。2.建立小鼠黄韧带肥厚模型,对黄韧带肥厚的分子机制进行体内验证。方法1.收集正常和肥厚的人黄韧带组织,组织学染色检测两组纤维化情况。用同位素相对标记与绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）技术对两组样本进行分析,整合转录组与蛋白质组数据,发现关键蛋白:细胞因子受体样因子1（Cytokine Receptor Like Factor 1,CRLF1）。使用免疫组化和qPCR技术对结果进行验证。2.分离并体外培养人正常黄韧带细胞,使用TGF-β1和成熟的重组人CRLF1刺激黄韧带细胞,通过免疫荧光、Westen Blot及q...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１．黄初带组织标本Ｈ＆Ｅ和马松染色：Ａ．正常黄軔带中纤维排列规则；Ｂ．增生黄钿带??中纤维排列不规则，发生断裂
ａｇｅｎ?ｆｉｂｅｒｓ；?Ｄ．?Ｔｈｅ?ｒｅｄ?ｅｌａｓｔｉｃ?ｆｉｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ??ｔｈｉｃｋ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ?ｆｌａｖｕｍ?ａｒｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ?ｒｅｄｕｃｅｄ．?（ｎ＝２０），?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒｓ?＝?１００?（ｉｍ．??３．２肥厚组黄韧带中Ｉ、Ｉ丨丨型胶原纤维增多，肌成纤维细胞增多，ｐ－ＥＲＫｌ／２表??达升髙。??免疫组化染色结果：对照组黄韧带组织中；Ｉ型胶原纤维、ＩＩＩ型胶原纤维??较少，肥厚黄軔带标本中Ｉ型胶原纤维、ＩＩＩ型胶原纤维明显增多（图１－２）。肌??成纤维细胞标志物ａ－ＳＭＡ在肥厚黄軔带中表达升高，ｐ－ＥＲＫｌ／２在肥厚的黄初带??中表达增高（图１－３）。差异有统计学意义（图１－４）。??Ａ?Ｂ??Ｃ?Ｄ??ｖ?＊Ｊ?ｖ??？?？?＊?ｖ?Ｖ＊?＊?、?■?ｔ??对照组?肥厚组??图１－２．黄韧带组织标本Ｉ型和ＩＩ丨型胶原纤维免疫组化染色，棕色为阳性。Ａ．对照组黄初??带中Ｉ型胶原纤维很少；Ｂ．肥厚组黄初带中Ｉ型胶原纤维明显增多。Ｃ．正常黄籾带中丨丨Ｉ??型胶原纤维很少；Ｄ．肥厚的黄韧带中丨丨１型胶原纤维明显增多。（ｎ?＝?２０），比例尺＝１００?ｐｍ。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２．?Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?Ｉ?ａｎｄ?ｔｙｐｅ?ＩＩＩ?ｏｆ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ??ｆｌａｖｕｍ，?（ｂｒｏｗｎ?ｉｓ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ａｒｅａ）．?Ａ．?Ｔｈｅｒｅ?ｗｅｒｅ?ｆｅｗ?ＣＯＬ１?ｆｉｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ??ｆｌａｖｕｍ：?Ｂ
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of cytokine receptor-like factor 1 in hepatic stellate cells and fibrosis[J]. Lela Stefanovic,Branko Stefanovic. World Journal of Hepatology. 2012(12)
本文编号：3323104
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１．黄初带组织标本Ｈ＆Ｅ和马松染色：Ａ．正常黄軔带中纤维排列规则；Ｂ．增生黄钿带??中纤维排列不规则，发生断裂
ａｇｅｎ?ｆｉｂｅｒｓ；?Ｄ．?Ｔｈｅ?ｒｅｄ?ｅｌａｓｔｉｃ?ｆｉｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ??ｔｈｉｃｋ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ?ｆｌａｖｕｍ?ａｒｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ?ｒｅｄｕｃｅｄ．?（ｎ＝２０），?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒｓ?＝?１００?（ｉｍ．??３．２肥厚组黄韧带中Ｉ、Ｉ丨丨型胶原纤维增多，肌成纤维细胞增多，ｐ－ＥＲＫｌ／２表??达升髙。??免疫组化染色结果：对照组黄韧带组织中；Ｉ型胶原纤维、ＩＩＩ型胶原纤维??较少，肥厚黄軔带标本中Ｉ型胶原纤维、ＩＩＩ型胶原纤维明显增多（图１－２）。肌??成纤维细胞标志物ａ－ＳＭＡ在肥厚黄軔带中表达升高，ｐ－ＥＲＫｌ／２在肥厚的黄初带??中表达增高（图１－３）。差异有统计学意义（图１－４）。??Ａ?Ｂ??Ｃ?Ｄ??ｖ?＊Ｊ?ｖ??？?？?＊?ｖ?Ｖ＊?＊?、?■?ｔ??对照组?肥厚组??图１－２．黄韧带组织标本Ｉ型和ＩＩ丨型胶原纤维免疫组化染色，棕色为阳性。Ａ．对照组黄初??带中Ｉ型胶原纤维很少；Ｂ．肥厚组黄初带中Ｉ型胶原纤维明显增多。Ｃ．正常黄籾带中丨丨Ｉ??型胶原纤维很少；Ｄ．肥厚的黄韧带中丨丨１型胶原纤维明显增多。（ｎ?＝?２０），比例尺＝１００?ｐｍ。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２．?Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?Ｉ?ａｎｄ?ｔｙｐｅ?ＩＩＩ?ｏｆ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ??ｆｌａｖｕｍ，?（ｂｒｏｗｎ?ｉｓ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ａｒｅａ）．?Ａ．?Ｔｈｅｒｅ?ｗｅｒｅ?ｆｅｗ?ＣＯＬ１?ｆｉｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ??ｆｌａｖｕｍ：?Ｂ
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of cytokine receptor-like factor 1 in hepatic stellate cells and fibrosis[J]. Lela Stefanovic,Branko Stefanovic. World Journal of Hepatology. 2012(12)
本文编号：3323104
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