Ovol2调节乳腺癌细胞干性的作用研究

发布时间：2021-08-21 18:49

　　目的:分析OVOL2在乳腺癌细胞系中的表达特征,研究OVOL2对乳腺癌细胞表面标志CD44的影响,探讨OVOL2对乳腺癌细胞干性的调控机制;检测过表达OVOL2对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;通过研究乳腺癌患者无复发生存时间,分析OVOL2与乳腺癌临床预后的相关性。方法:1.采用Western blotting方法检测不同乳腺癌细胞中OVOL2蛋白的表达水平;在不同乳腺癌细胞中过表达和敲减OVOL2,检测CD44蛋白表达水平变化;2.利用流式细胞检测方法检测过表达OVOL2对具有CD44⁺/CD24^-/low标记的乳腺癌细胞比例的影响;3.采用细胞培养,进行划痕实验、Transwell实验和乳腺微球体培养的方法,过表达OVOL2,研究OVOL2对乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响;4.采用染色质免疫共沉淀技术检测OVOL2在CD44启动子上的结合位点,研究OVOL2调节干性作用的结构基础;5.分析Kaplan-Meier Plotter数据库数据进行生存分析,研究OVOL2的表达水平与乳腺癌临床预后的相关性。6.采用SPSS19.... 

【文章来源】：河南科技大学河南省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 乳腺癌概述
        1.1.2 肿瘤干细胞
        1.1.3 乳腺癌干细胞鉴定分选
        1.1.4 乳腺癌分型
        1.1.5 乳腺癌干性相关信号通路
        1.1.6 CD44 和肿瘤干细胞
        1.1.7 OVOL2 与乳腺癌干细胞
    1.2 研究目的
    1.3 研究意义
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要实验试剂
        2.1.2 细胞株
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞冻存
        2.2.2 细胞复苏
        2.2.3 细胞传代
        2.2.4 PEI(聚乙烯亚胺)转染
        2.2.5 慢病毒包装及感染细胞
        2.2.6 细胞计数方法
        2.2.7 siRNA转染
        2.2.8 Transwell实验
        2.2.9 细胞划痕实验
        2.2.10 乳腺微球体培养
        2.2.11 流式细胞检测
        2.2.12 提取细胞RNA
        2.2.13 RNA反转录
        2.2.14 RT-PCR
        2.2.15 蛋白质提取实验
        2.2.16 BCA法测定蛋白质浓度
        2.2.17 蛋白质免疫印迹
        2.2.18 染色质免疫沉淀(CHIP)
        2.2.19 感受态细胞制备
        2.2.20 转化
        2.2.21 质粒提取
第3章 实验结果
    3.1 OVOL2 与乳腺癌复发的关系
    3.2 OVOL2抑制乳腺癌干细胞相关表型
        3.2.1 OVOL2 抑制乳腺球形成
        3.2.2 OVOL2 抑制CD44~+/CD24~(?/low)细胞比例(MDA-MB-231 细胞)
        3.2.3 OVOL2 抑制侵袭能力
        3.2.4 OVOL2 抑制迁移能力
    3.3 OVOL2 下调CD44 的表达
        3.3.1 OVOL2在不同乳腺癌细胞株中表达
        3.3.2 OVOL2在MDA-MB-231 细胞中过表达下调CD
        3.3.3 MCF-7 细胞敲减OVOL2后CD44 表达上调
    3.4 CHIP
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间的研究成果



本文编号：3356144