MicroRNA-1通过抑制Ihh调控软骨细胞表型研究

发布时间：2021-08-26 04:41

　　目的:（1）在软骨细胞体外培养过程中,分析mi R-1抑制或过表达后对小鼠肋软骨细胞分化增殖与基质代谢的影响,检测相关指标。（2）在软骨细胞体外培养过程中,过表达mi R-1后及抑制后对Ihh基因及蛋白水平的影响,并检测Ihh通路相关蛋白的变化,探究mi R-1是否通过直接作用于Ihh对下游产生作用。方法:（1）mi R-1对小鼠肋软骨细胞增殖,基质代谢和分化影响分析:（1）取出生5天小鼠胸廓软骨组织,用两步酶消法进行分离软骨细胞,行原代及传代培养,并按100n M浓度转染mi R-1模拟物/mi R-1抑制剂及其对照组进入细胞。应用RT-PCR分析mi R-1转染24h后的转染效率。（2）利用EDU实验,CCK-8实验检测转录后细胞增殖情况（3）mi R-1对软骨细胞增殖及分化的影响:以100n M进行mi R-1模拟物/mi R-1抑制剂及对照的细胞转染。培养24h后,RT-PCR技术分析Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、MMP-13等指标m RNA的变化情况。（4）对转染细胞培养48h后上清液Ⅹ型胶原、MMP-13等指标的含量进行ELISA检测。（5）免疫荧光用于检测各组Ⅱ型胶原、Ihh含量。... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

小鼠肋软骨细胞免疫荧光染色

miR-1转染效率检测，转染后miR-1表达情况，U6为内参，miR-1组与ConmiR组相比，miR-1水平明显增高，*P＜0.05

Anti-miR-1转染效率，转染后miR-1表达情况，U6为内参，Anti-miR-1组与Control组相比，miR-1水平明显降低，*P＜0.05


本文编号：3363566