多巴胺负调控NF-κB和JAK2/STAT3信号通路延缓关节软骨退变的实验研究
发布时间：2021-08-29 21:59
研究背景骨关节炎（Osteoarthritis,OA）是一种常见的以软骨退变、滑膜炎、软骨下骨硬化、关节囊肥大为特征的慢性退行性疾病,在老龄化不断加剧的社会背景下,其发病率逐年攀升,严重影响患者生活质量,给家庭及社会带来了沉重的经济负担。过去常常认为OA的发生仅仅是由关节磨损所引起,但越来越多的研究表明炎症在其发病机理中起着至关重要的作用。文献报道,IL-1β（interleukin-1β）、IL-6（interleukin-6）、TNF-α（tumor necrosis factor-α）等促炎细胞因子在骨关节炎患者软骨组织内表达升高,血液中CRP（C-reactionprotein）浓度高的患者疾病进展速度较浓度低的患者快。持续存在的炎症因子能够刺激软骨细胞产生MMP-1（matrix metalloproteinase-1）,MMP-3,MMP-13和其他基质分解代谢酶,导致软骨细胞合成与分解代谢失衡。多巴胺（Dopamine,DA）是一种重要的神经递质,具有控制运动、情绪、认知和内分泌等功能。最近研究表明DA还具有很强的抗炎、抗氧化能力,能够通过抑制NF-κB信号通路下调IL-...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人软骨细胞鉴定
安徽医科大学硕士学位论文29胞质呈绿色，细胞核呈深蓝色。比例尺=50μm。3.2DA对软骨细胞的毒性效应CCK-8法探究DA对软骨细胞的毒性效应，筛选DA在软骨细胞中的治疗浓度。该方法实验原理为WST-8在电子耦合试剂存在的情况下能够被线粒体内的脱氢酶还原成橙黄色的甲瓒产物（Formazan）。通常认为在同一种细胞内，颜色深浅与活细胞数量成正比。结果显示，低浓度区间的DA（0-100μM）无论是对C28/I2软骨细胞（图2A）还是对人软骨细胞（图2B）均未表现出明显的毒性效应，但是高浓度的DA（≥200μM）则对软骨细胞活性产生较强抑制作用。鉴于此，选择25μM、50μM、100μM三组浓度用于后续实验研究。图2DA对软骨细胞的毒性效应。不同浓度DA与软骨细胞共同孵育24h，通过CCK-8法分析DA对软骨细胞的毒性效应。（A）C28/I2软骨细胞；（B）人软骨细胞。数据表示为均值±标准差，#P<0.05VS对照组。3.3DA遏制IL-1β引起的软骨细胞GAGs沉积减少糖胺聚糖（GAGs）是软骨组织特异性基质蛋白，在OA进展过程中，糖胺聚糖沉积减少会引起胶原蛋白丢失过多。为了评估DA对GAGs沉积变化的影响，使用IL-1β与软骨细胞共同孵育模拟OA体外微环境。结果显示，不论是在C28/I2软骨细胞（图3A）还是人软骨细胞（图3B），IL-1β处理组GAGs沉积量较对照组明显降低，加入DA后GAGs沉积量增加。
安徽医科大学硕士学位论文30图3OA体外软骨细胞模型中加入DA能够遏制IL-1β引起的GAGs沉积减少。（A）C28/I2软骨细胞；（B）人软骨细胞。原始放大倍数200倍，比例尺=50μm。3.4DA对OA体外模型中软骨细胞合成代谢与分解代谢的影响软骨细胞负责细胞外基质的合成与代谢，合成与分解代谢失衡是导致软骨退变的重要因素。基质金属蛋白能降解细胞外基质中多种蛋白成分，在OA发病过程中扮演重要角色。其中MMP-1和MMP-13是导致胶原框架降解的主要因素，MMP-3负责降解蛋白聚糖。II型胶原蛋白是软骨组织主要结构蛋白，能够排列成三维网状结构容纳其他胶原蛋白与非胶原蛋白，从而使软骨组织具备一定的机械可变性。采用qRT-PCR和Westernblot两种实验方法检测DA在OA体外微环境中对合成代谢指标蛋白（CollagenII），分解代谢指标蛋白（MMP-1、MMP-3、MMP-13）表达的调控。结果显示，IL-1β能够明显引起C28/I2软骨细胞（图4A、B、C、D、I）和人软骨细胞（图4E、F、G、H、J）中MMP-1、MMP-3、MMP-13表达增加以
本文编号：3371462
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人软骨细胞鉴定
安徽医科大学硕士学位论文29胞质呈绿色，细胞核呈深蓝色。比例尺=50μm。3.2DA对软骨细胞的毒性效应CCK-8法探究DA对软骨细胞的毒性效应，筛选DA在软骨细胞中的治疗浓度。该方法实验原理为WST-8在电子耦合试剂存在的情况下能够被线粒体内的脱氢酶还原成橙黄色的甲瓒产物（Formazan）。通常认为在同一种细胞内，颜色深浅与活细胞数量成正比。结果显示，低浓度区间的DA（0-100μM）无论是对C28/I2软骨细胞（图2A）还是对人软骨细胞（图2B）均未表现出明显的毒性效应，但是高浓度的DA（≥200μM）则对软骨细胞活性产生较强抑制作用。鉴于此，选择25μM、50μM、100μM三组浓度用于后续实验研究。图2DA对软骨细胞的毒性效应。不同浓度DA与软骨细胞共同孵育24h，通过CCK-8法分析DA对软骨细胞的毒性效应。（A）C28/I2软骨细胞；（B）人软骨细胞。数据表示为均值±标准差，#P<0.05VS对照组。3.3DA遏制IL-1β引起的软骨细胞GAGs沉积减少糖胺聚糖（GAGs）是软骨组织特异性基质蛋白，在OA进展过程中，糖胺聚糖沉积减少会引起胶原蛋白丢失过多。为了评估DA对GAGs沉积变化的影响，使用IL-1β与软骨细胞共同孵育模拟OA体外微环境。结果显示，不论是在C28/I2软骨细胞（图3A）还是人软骨细胞（图3B），IL-1β处理组GAGs沉积量较对照组明显降低，加入DA后GAGs沉积量增加。
安徽医科大学硕士学位论文30图3OA体外软骨细胞模型中加入DA能够遏制IL-1β引起的GAGs沉积减少。（A）C28/I2软骨细胞；（B）人软骨细胞。原始放大倍数200倍，比例尺=50μm。3.4DA对OA体外模型中软骨细胞合成代谢与分解代谢的影响软骨细胞负责细胞外基质的合成与代谢，合成与分解代谢失衡是导致软骨退变的重要因素。基质金属蛋白能降解细胞外基质中多种蛋白成分，在OA发病过程中扮演重要角色。其中MMP-1和MMP-13是导致胶原框架降解的主要因素，MMP-3负责降解蛋白聚糖。II型胶原蛋白是软骨组织主要结构蛋白，能够排列成三维网状结构容纳其他胶原蛋白与非胶原蛋白，从而使软骨组织具备一定的机械可变性。采用qRT-PCR和Westernblot两种实验方法检测DA在OA体外微环境中对合成代谢指标蛋白（CollagenII），分解代谢指标蛋白（MMP-1、MMP-3、MMP-13）表达的调控。结果显示，IL-1β能够明显引起C28/I2软骨细胞（图4A、B、C、D、I）和人软骨细胞（图4E、F、G、H、J）中MMP-1、MMP-3、MMP-13表达增加以
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