TGF-β1联合IGF-1诱导BMSCs复合丝素蛋白/胶原蛋白支架构建功能软骨的研究

发布时间：2021-08-31 11:43

　　目的:关节软骨损伤严重影响着人们的生活质量,同时骨关节软骨疾病开始趋于年轻化。目前临床上治疗此类疾病的方法主要包括自体或同种异体软骨移植,但给供区造成新的损伤,同时供体来源有限,不能满足临床需求。本研究在相关文献报道基础上,利用天然材料丝素和胶原蛋白,冷冻干燥法来制备复合支架,TGF-β1联合IGF-1诱导BMSCs作为种子细胞,构建组织工程化培养模型,在微环境下诱导BMSCs向软骨细胞分化。方法:1.采用密度梯度离心法分离大鼠BMSCs,体外培养扩增并观察其特征。2.软骨方向诱导鉴定:取第三代BMSCs,加入软骨诱导液,2周后分别行甲苯胺蓝和番红素O染色。3.丝素蛋白/胶原蛋白组织工程支架的制备:以桑蚕丝和牛腱为原料制备丝素蛋白和胶原蛋白,将二者溶液按不同比例进行共混,冷冻,真空干燥,制备复合支架（编号1,2,3组）。检测每组支架材料的孔隙率、吸水率、力学性能、孔径。取第三代骨髓间充质干细胞（BMSCs）接种支架,培养14天,利用噻唑蓝（MTT）、苏木素-伊红（HE）染色、扫描电镜（SEM）观察每组支架内部结构及细胞在内部的生长增殖。4.组织工程化培养模型的建立:构建组织工程化培养模... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩写
前言
材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 实验材料
        1.1.3 实验试剂
        1.1.4 实验设备
    1.2 大鼠BMSCs分化潜能的鉴定方法
        1.2.1 干细胞提取与培养
        1.2.2 多聚赖氨酸防脱片的制备
        1.2.3 软骨方向鉴定
        1.2.4 甲苯胺蓝染色
        1.2.5 番红素O染色
    1.3 丝素蛋白复合胶原蛋白支架的制备
        1.3.1 丝素蛋白制备
        1.3.2 胶原蛋白制备
        1.3.3 制备支架
    1.4 复合支架性能检测
        1.4.1 孔隙率测定
        1.4.2 吸水膨胀率测
        1.4.3 力学性能检测
        1.4.4 孔径测定
        1.4.5MTT检测细胞相容性
        1.4.6 HE染色观察
        1.4.7 扫描电镜观察
    1.5 阿利新蓝法测定培养液上清中糖胺多糖的含量
        1.5.1 组织工程化培养模型的建立
        1.5.2 实验原理
        1.5.3 实验方法
    1.6 免疫组化检测Ⅱ型胶原
        1.6.1 实验原理
        1.6.2.实验方法
    1.7 统计学分析
结果
    1.8
        1.8.1 大鼠BMSCs的提取
        1.8.2 大鼠BMSCs的原代培养与扩增
        1.8.3 大鼠BMSCs的软骨分化潜能的鉴定
        1.8.4 SF/ COL组织工程支架的制备及其理化性质的检测
        1.8.5 组织工程化培养模型成软骨能力的检测
            1.8.5.1 组织工程化培养模型的的建立
            1.8.5.2 诱导后培养模型分泌糖胺多糖含量的变化
            1.8.5.3 诱导培养模型免疫组织化鉴定
附图
附表
讨论
    1.9
        1.9.1 种子细胞的来源、分离及其稳定扩增
        1.9.2 支架材料的选择及制备
            1.9.2.1 支架材料的选择
            1.9.2.2 支架制备方法
            1.9.2.3 支架的理化性质
            1.9.2.4 支架的细胞相容性
        1.9.3 生长因子及其作用方式的选择
            1.9.3.1 生长因子的选择
            1.9.3.2 生长因子作用方式的选择
        1.9.4 软骨分化程度指标及其意义
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 软骨组织工程研究进展
    综述参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠BMSCs成骨诱导及复合支架材料构建组织工程骨组织的研究[J]. 年争好,孙凯,李晖,李东,徐成,张新昌,张西正,李瑞欣.  生物骨科材料与临床研究. 2015(01)
[2]人脐带间充质干细胞在软骨组织工程中的应用[J]. 陈超,亓建洪,陈彬.  中国医学工程. 2015(01)
[3]丝素蛋白复合胶原蛋白支架的制备及性能研究[J]. 孙凯,年争好,徐成,李瑞欣,李晖.  中国修复重建外科杂志. 2014(07)
[4]壳聚糖复合蚕丝蛋白支架的制备及其性能研究[J]. 张鹏,王文良.  中国修复重建外科杂志. 2013(12)
[5]关节软骨组织工程支架的研究进展[J]. 刘清宇,王富友,杨柳.  中国修复重建外科杂志. 2012(10)
[6]动物源性骨软骨支架复合骨髓间充质干细胞/软骨细胞修复兔膝关节骨软骨复合缺损（英文）[J]. 谭文成,查振刚,张嘉晴,郑立恒,梁耀中,夏吉生,黄馨霈,吴昊,林宏生.  中国组织工程研究与临床康复. 2011(12)
[7]兔骨髓间充质干细胞培养及向成软骨细胞的诱导分化[J]. 郭璇,霍然,吕仁荣,林莉.  中国组织工程研究与临床康复. 2011(06)
[8]软骨组织工程支架材料的研究进展[J]. 韩宁波,赵建宁.  医学研究生学报. 2010(01)
[9]组织工程技术修复关节软骨的理论研究与进展[J]. 李晓声,陈铁柱,杜尧,曾焱,曾文魁.  中国组织工程研究与临床康复. 2009(37)
[10]永生化骨骺软骨细胞的生物学性状研究[J]. 李欣,黄仕龙,金润铭.  临床儿科杂志. 2007(11)

博士论文
[1]定向结构软骨支架复合骨髓基质干细胞修复兔关节软骨缺损的研究[D]. 贾帅军.第四军医大学 2012
[2]体外构建组织工程软骨的实验研究[D]. 孔清泉.四川大学 2005
[3]外胚间充质干细胞的多向分化及在组织工程周围神经再生中的应用[D]. 聂鑫.第四军医大学 2004

硕士论文
[1]图钉样一体化仿生复合支架的制备与表征[D]. 熊远飞.南昌大学 2014
[2]TGF-β1基因转染BMSCs复合蚕丝蛋白-壳聚糖支架构建功能软骨的研究[D]. 张鹏.河北医科大学 2014
[3]外源性TGF-β1和IGF-1诱导骨髓间充质干细胞定向分化软骨细胞的实验研究[D]. 谭荣邦.扬州大学 2013
[4]力学作用对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化影响的研究[D]. 毛艳.中国人民解放军军事医学科学院 2006
[5]胰岛素样生长因子-I、碱性成纤维细胞生长因子和透明质酸钠对藻酸钙载体—关节软骨细胞复合物的生物学效应[D]. 汤旭日.第二军医大学 2005



本文编号：3374833