“核HO-1”对缺氧诱导后体外血脊髓屏障通透性的影响

发布时间：2021-09-06 14:03

　　目的研究“核HO-1”是否降低缺氧损伤后的体外血脊髓屏障的通透性。方法培养人脑微血管内皮细胞（HCMEC/D3）和人脊髓星型胶质细胞（HA-sc）,并将HO-1C?23质粒和空载质粒分别转染到HCMEC/D3中,转染HO-1C?23三天后,提取转染HO-1C?23和空白对照HCMEC/D3细胞核和细胞浆蛋白,western检测细胞核和细胞浆中血红素氧合酶1（Heme Oxygenase 1,HO-1）蛋白表达量,HCMEC/D3细胞与HA-sc细胞利用Transwell小室构建体外血脊髓屏障,分为HO-1C?23组、空载组、空白对照组,分别给予终浓度为150μM氯化钴缺氧诱导24h处理,western技术检测微囊蛋白1（caveolin-1,CAV-1）、微囊蛋白2（caveolin-2,CAV-2）、ZO-1、occludin蛋白表达,免疫荧光技术检测CAV-1、CAV-2、ZO-1、occludin分布情况,HRP检测血脊髓屏障通透性。结果转染HO-1C?23较空白对照HCMEC/D3细胞核HO-1蛋白表达量明显增高（P<0.05）,而细胞浆HO-1表达量无明显差异（P>... 

【文章来源】：锦州医科大学辽宁省

【文章页数】：36 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各组细胞浆HO-1表达情况

图 4 各组 CAV-2 表达情况图注：各组 CAV-2 相对表达量与空载组比较，HO-1CΔ23 组 CAV-1 相对表达量明显减少＃P＜0.05，与空白对组比较，HO-1CΔ23 组 CAV-2 相对表达量明显减少＃P＜0.05，与空载组比较，空白对照组 CAV-2 相对表达量无明显差异＃＃P>0.05。三、各组 CAV-1、CAV-2 蛋白免疫荧光分布情况在 western 结果下，我们进一步运用免疫荧光技术，检测各组 CAV-1、CAV-2、蛋白分布情况，从免疫荧光结果看，各组 CAV-1、CAV-2 蛋白主要在细胞膜表达，并且 HO-1C 23 组 CAV-1 和 CAV-2 表达较空载组和空白对照组相比减少，这与脊髓微血管内皮细胞有致密的细胞间连接，缺乏窗孔和吞饮小泡[14]结论相一致。（见图 5，图 6）HO-1C 23组空空组空空空空组0.0组组

图 6 各组 CAV-2 分布情况（荧光显微镜 x20）四、Western 检测 ZO-1、Occludin 蛋白表达情况为确定“核 HO-1”是否通过细胞旁途径降低血脊髓屏障通透性，我们运用Western 检测各组紧密连接蛋白 Z0-1、occludin 蛋白表达情况，结果显示：经统计学分析，HO-1C 23 组与空载及空白对照组相比差异有统计学意义（＃P＜0.05），而空载组与空白对照组相比差别无统计学意义（＃＃P>0.05）。与空载组及空白对照比较，HO-1C 23 组 ZO-1、occludin 蛋白表达明显增加，空载组与空白对照组比较 ZO-1、Occludin 蛋白表达无明显差异。（见图 7）

【参考文献】：
期刊论文
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[2]Carbon monoxide contributes to the constipating effects of granisetron in rat colon[J]. Carmela Nacci,Margherita Fanelli,Maria Assunta Potenza,Valentina Leo,Monica Montagnani,Maria Antonietta De Salvia.  World Journal of Gastroenterology. 2016(42)
[3]Shh/Gli1信号参与小鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障渗透性改变及运动功能恢复[J]. 樊洪,邝芳,王亚周,鞠躬.  神经解剖学杂志. 2013(03)
[4]人血脑屏障体外实验模型的建立及缺氧-复氧对其通透性的影响[J]. 冯洁,叶丽亚,张文健,刘杰文,娄晋宁,李成辉.  中国医药生物技术. 2008(02)



本文编号：3387593