BAG3介导的选择性自噬在运动治疗骨关节炎中的作用研究

发布时间：2021-09-28 06:54

　　目的:骨关节炎是一种常见的年龄相关的慢性关节疾病,影响着相当数量的中老年人。主要表现为严重的疼痛和活动障碍,发病机制复杂,治疗手段有限,造成的患者生活质量下降以及其带来的社会经济负担难以估量。目前随着我国人口老龄化加剧,以及人们对生活质量的要求不断提高,骨关节炎的发病率和就诊率越来越高,在目前的研究基础上进一步探讨其发病机制,寻求经济有效的治疗手段具有重要意义。软骨细胞自我再生及修复能力较差,因此维持软骨细胞的自稳态在关节退化,骨关节炎的发病过程中有关键性的作用。自噬作为真核细胞中重要的细胞稳态机制发挥重要作用。目前骨关节炎与自噬的研究停留在非选择性自噬上。近年来发现的BAG3介导的协同分子伴侣的选择性自噬（Chaperone-assisted selective autophagy,CASA）是一种新型的选择性自噬通路,主要作用是识别错误折叠的蛋白质并将其降解再利用,已被证明在很多疾病中起关键作用。适度运动治疗骨关节炎已被大量文献证明了,但其中的分子机制尚不完全清除,探索CASA在软骨细胞中的表达变化以及在骨关节炎模型及运动干预作用下的变化规律,有利于我们进一步了解骨关节炎发病机制及... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：81 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

大鼠原代软骨细胞形态与II型胶原免疫染色（A）长满培养瓶的大鼠原代软骨细胞

14图 1.2 II 型胶原和 ADAMTS5 的免疫荧光染色（A，B）图片放大倍数 40X。3.3 不同浓度 MIA 不同干预时间对大鼠原代软骨细胞 CASA 通路相关蛋白的影响

中国医科大学博士学位论文3.3.1 CCK8 检测不同干预条件下细胞活性变化增强型 CCK8 试剂盒是基于 WST-8 的应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物，在电子耦合剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深，细胞毒性越大则颜色越浅，对于同样的细胞，颜色深浅和细胞数目呈线性关系。将细胞加入一定浓度 MIA 干预一定时间后，从培养箱取出，加入 CCK8 试剂，继续孵育一段时间后于酶标仪上测定 450nm 吸光度值（可在不同时间用酶标仪反复读板，找到最佳读板时间点）。我们最终使用了终浓度为 1uM 和 20uM 的 MIA，干预时间分别为 24h 和 1h。分组为对照组，MIA1 组（短时干预组）和 MIA2 组（长时干预组）。CCK8 结果显示在此干预条件下细胞活性大致在 70%，如图 1.3。


本文编号：3411441