CEBPB基因敲低对三阴性乳腺癌BT549细胞株增殖和侵袭能力的影响及分子机制研究

发布时间：2021-09-29 03:54

　　目的:本研究以属于三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）的BT549细胞株作为研究对象,探讨CCAAT/增强子结合蛋白（CCAAT/enhancer binding protein beta,CEBPB）对BT549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探寻相关分子机制。方法:利用慢病毒构建CEBPB基因稳定敲低的BT549细胞株,并通过Real-time PCR和Western Blot分别在mRNA水平和蛋白质水平对慢病毒的敲低效果进行检测。CCK-8实验检测敲低CEBPB基因后对BT549细胞增殖能力的影响。集落克隆形成实验检测敲低CEBPB基因后对BT549细胞集落克隆形成能力的影响。使用EdU试剂盒检测敲低CEBPB基因后对BT549细胞S期的影响。通过细胞划痕实验检测敲低CEBPB基因后对BT549细胞划痕愈合能力的影响。通过细胞侵袭实验检测CEBPB基因敲低后对BT549细胞侵袭能力的影响。通过分析转录组测序结果获得CEBPB敲低组细胞和对照组细胞的mRNA表达数据,研究CEBPB调控TNBC的分子机制。结果:成功构建CEBP... 

【文章来源】：蚌埠医学院安徽省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CEBPB基因在TNBC中呈高表达（A）TNBC与非TNBC中CEBPBmRNA表达水平的比较

29图 2 成功构建 CEBPB 基因稳定敲低的 BT549 细胞系A）荧光显微镜观察慢病毒的感染效率。B）Real-time PCR 检测慢病毒载体感染 BT549 细胞后 CEBPB mRNA 的C）Western Blot 检测慢病毒载体感染 BT549 细胞后 CEBPB 蛋白的相对**P<0.001，t 检验。

PB 基因敲低对 BT549 细胞增殖、集落克隆形成和周期的1 中的结果提示 CEBPB 与 TNBC 之间存在着密切联系，我们通过落克隆形成实验和 EdU 实验检测了在敲低 BT549 细胞中 CEBP BT549 细胞增殖方面的影响。图 3 中 CCK-8 实验结果显示 CE细胞活力明显低于阴性对照组的细胞活力。图 4 中集落克隆形成CEBPB 基因敲低组的 BT549 细胞形成更少、更小的集落。此外，示，敲低 CEBPB 基因的表达导致位于 S 期的细胞数目比例减少见图 5A 和图 5B。这些结果表明，CEBPB 基因能够促进 BT549周期的进行。


本文编号：3413149