LOC339524和UQCRC1介导心/脑保护的作用和机制研究
发布时间：2021-10-11 00:03
目的:基础疾病、手术创伤和术中体位改变等会对患者生理功能造成不同程度的影响,病人围术期极易发生心脑脆弱器官的缺血/再灌注损伤,并且术中呼吸和循环系统的稳定直接影响病人术后恢复,因此如何保证患者围术期安全,预防围术期不良事件的发生是麻醉医生面临的重大挑战。LOC339524是课题组于2012年在研究人心脏早期停跳灌流液的蛋白质组学时通过高效液相色谱-芯片/质谱（High performance liquid chromatography-chip/mass spectrometry,HPLC-Chip/MS）技术分离、鉴定的新蛋白,随后制备了单克隆抗体5-D3。前期研究发现LOC339524可能参与了胚胎期大鼠心脏的发育,并且能调控H9C2心肌细胞的分裂增殖。除此之外,课题组前期研究还证实LOC339524参与大脑炎症的调控,其高表达可以明显减轻脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）导致的小胶质细胞炎症反应。这些均提示LOC339524具有重要的功能,可能参与器官保护。但LOC339524在心肌缺血/再灌注损伤中的作用和机制尚不清楚,并且其减轻BV-2小胶质细胞炎症反应的...
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：143 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
LOC339524是一个由注释为LncRNA的基因编码的蛋白(A)WesternBlot检测LOC339524蛋白的外源性表达情况
图 2 缺氧可以诱导 LOC339524 的表达并分泌至胞外(A）和（B）生物信息学对 LOC339524 蛋白信号肽的预测。(C)RT-qPCR 检测细胞置于 1%O2环境中 24h 对 LOC339524 mRNA 的影响。(D) RT-qPCR 检测 CoCl2模拟的缺氧环境对 LOC339524mRNA 的影响。(E) RT-qPCR 检测 SD 大鼠缺氧 0-72h 后心肌组织中 LOC339524 mRNA 的变化。（F）Western Blot 分析常氧和 1%O2对LOC339524蛋白胞质和胞核定位及表达量的影响。（G）Western Blot分析 SD 大鼠缺氧 0-72h 后心肌组织和血清外泌体中 LOC339524 蛋白的变化。（*p<0.05）2.2.3 LOC339524 不受无义介导的 mRNA 降解（Nonsense-Mediated mRNA Decay，NMD）途径调控NMD被认为是基因转录后调控的重要途径，在所有的真核细胞中都可以发挥功能，如真菌，植物，脊椎动物中等，可以保证蛋白翻译在正确的终止密码子处停止。作为一种mRNA质量控制途径，可识别并降解含有提前终止密码子(prematuretermination codons，PTC ) 的异常mRNA，避免截短蛋白( truncated protein)积累[57]。目
图 3 慢病毒介导的 UPF1/Rent1 过表达稳转细胞株鉴定(A）PCR 扩增 UPF1 基因。（B）UPF1 基因亚克隆。(C)载体的 BamH I+Xho I 双酶切鉴定。（D）~（G）依次分别 Western Blot 对 H9C2，AC16，HMO6 和 LO2 细胞高表达 UPF1/Rent1 后 UPF1/Rent1蛋白的表达情况及其统计分析。（*p<0.05，**p<0.01）2.2.3.2 siUPF1 沉默 UPF1/Rent1 最佳片段、时间和浓度的筛选将三条 siUPF1 片段（siUPF1-001，siUPF1-002，siUPF1-003）以 50nmol/L 转染 H9C2细胞，对照组转染相同浓度的无关片段（siNC）48h 后提取蛋白，Western Blot 检测UPF1/Rent1 的表达。结果发现，siUPF1-001 沉默 UPF1/Rent1 的效果最好，可沉默约61.97%（0.902 0.2 vs.0.343 0.081，p=0.004），故后续选用 siUPF1-001（Fig 4A）。将 50nmol/L，100nmol/L 和 200nmol/L 的 siUPF1-001 转染 H9C2 细胞，对照组转染相同浓度的 siNC，与 24h，48h 和 72h 分别提取蛋白，Western Blot 检测 UPF1/Rent1 的表达。结果发现，100nmol/L 作用 48h 沉默 UPF1/Rent1 的效果最好，可达 82.47%（0.972 0.120vs.0.126 0.075，p=0.000）（Fig 4B）。将筛选到的 100nmol/L siUPF1-001 转染 AC16，
【参考文献】：
期刊论文
[1]美国抑制青少年儿童肥胖快速增长趋势的体育干预研究[J]. 张大超,李敏,李军言. 沈阳体育学院学报. 2019(06)
[2]上调Uqcrc1表达在过氧化氢诱导的心肌细胞氧化应激中的作用[J]. 梁霄,柏小川. 郑州大学学报(医学版). 2019(05)
[3]基于人口老龄化现状对医疗服务管理的挑战及对策[J]. 王玉川,李柏志. 中国老年学杂志. 2019(13)
[4]LOC339524基因介导脂多糖诱导小鼠小胶质bv2细胞系炎症因子的表达[J]. 唐相龙,龙宗泓,段光友,周小英,陈慧芳,李洪. 第三军医大学学报. 2019(04)
[5]Uqcrc1的RNA干扰片段筛选及其对H9C2心肌细胞耐受缺氧/复氧损伤的影响[J]. 吴潇潇,李洪,易婷婷,杨天德. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(24)
[6]UQCRC1在结直肠癌及转移淋巴结中的表达[J]. 王宁,陈洋,姜奕. 世界华人消化杂志. 2012(03)
[7]Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:Role of mitochondria and reactive oxygen species[J]. Maria-Giulia Perrelli,Pasquale Pagliaro,Claudia Penna. World Journal of Cardiology. 2011(06)
[8]线粒体基因与核基因协同表达的机制[J]. 顾明亮,汪业军,陈姝,张永彪. 生命的化学. 2009(06)
[9]Protein profile of human hepatocarcinoma cell line SMMC-7721:Identification and functional analysis[J]. Yi Feng, Zhong-Min Tian, Ming-Xi Wan, Zhao-Bin Zheng The Key Laboratory of Biomedical Information Engineering of Ministry of Education, Department of Biomedical Engineering, School of Life Science and Technology, Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710049, Shaanxi Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2007(18)
[10]Mechanism of the protective effects of noninvasive limbs preconditioning on myocardial ischemia-reperfusion injury[J]. CHEN Xiao-guang, WU Bin-yang, WANG Jun-ke and BAI Tao Department of Anesthesiology, First Affiliated Hospital, China Medical Unive rsity, Shenyang 110001, China. Chinese Medical Journal. 2005(20)
本文编号：3429403
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：143 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
LOC339524是一个由注释为LncRNA的基因编码的蛋白(A)WesternBlot检测LOC339524蛋白的外源性表达情况
图 2 缺氧可以诱导 LOC339524 的表达并分泌至胞外(A）和（B）生物信息学对 LOC339524 蛋白信号肽的预测。(C)RT-qPCR 检测细胞置于 1%O2环境中 24h 对 LOC339524 mRNA 的影响。(D) RT-qPCR 检测 CoCl2模拟的缺氧环境对 LOC339524mRNA 的影响。(E) RT-qPCR 检测 SD 大鼠缺氧 0-72h 后心肌组织中 LOC339524 mRNA 的变化。（F）Western Blot 分析常氧和 1%O2对LOC339524蛋白胞质和胞核定位及表达量的影响。（G）Western Blot分析 SD 大鼠缺氧 0-72h 后心肌组织和血清外泌体中 LOC339524 蛋白的变化。（*p<0.05）2.2.3 LOC339524 不受无义介导的 mRNA 降解（Nonsense-Mediated mRNA Decay，NMD）途径调控NMD被认为是基因转录后调控的重要途径，在所有的真核细胞中都可以发挥功能，如真菌，植物，脊椎动物中等，可以保证蛋白翻译在正确的终止密码子处停止。作为一种mRNA质量控制途径，可识别并降解含有提前终止密码子(prematuretermination codons，PTC ) 的异常mRNA，避免截短蛋白( truncated protein)积累[57]。目
图 3 慢病毒介导的 UPF1/Rent1 过表达稳转细胞株鉴定(A）PCR 扩增 UPF1 基因。（B）UPF1 基因亚克隆。(C)载体的 BamH I+Xho I 双酶切鉴定。（D）~（G）依次分别 Western Blot 对 H9C2，AC16，HMO6 和 LO2 细胞高表达 UPF1/Rent1 后 UPF1/Rent1蛋白的表达情况及其统计分析。（*p<0.05，**p<0.01）2.2.3.2 siUPF1 沉默 UPF1/Rent1 最佳片段、时间和浓度的筛选将三条 siUPF1 片段（siUPF1-001，siUPF1-002，siUPF1-003）以 50nmol/L 转染 H9C2细胞，对照组转染相同浓度的无关片段（siNC）48h 后提取蛋白，Western Blot 检测UPF1/Rent1 的表达。结果发现，siUPF1-001 沉默 UPF1/Rent1 的效果最好，可沉默约61.97%（0.902 0.2 vs.0.343 0.081，p=0.004），故后续选用 siUPF1-001（Fig 4A）。将 50nmol/L，100nmol/L 和 200nmol/L 的 siUPF1-001 转染 H9C2 细胞，对照组转染相同浓度的 siNC，与 24h，48h 和 72h 分别提取蛋白，Western Blot 检测 UPF1/Rent1 的表达。结果发现，100nmol/L 作用 48h 沉默 UPF1/Rent1 的效果最好，可达 82.47%（0.972 0.120vs.0.126 0.075，p=0.000）（Fig 4B）。将筛选到的 100nmol/L siUPF1-001 转染 AC16，
【参考文献】：
期刊论文
[1]美国抑制青少年儿童肥胖快速增长趋势的体育干预研究[J]. 张大超,李敏,李军言. 沈阳体育学院学报. 2019(06)
[2]上调Uqcrc1表达在过氧化氢诱导的心肌细胞氧化应激中的作用[J]. 梁霄,柏小川. 郑州大学学报(医学版). 2019(05)
[3]基于人口老龄化现状对医疗服务管理的挑战及对策[J]. 王玉川,李柏志. 中国老年学杂志. 2019(13)
[4]LOC339524基因介导脂多糖诱导小鼠小胶质bv2细胞系炎症因子的表达[J]. 唐相龙,龙宗泓,段光友,周小英,陈慧芳,李洪. 第三军医大学学报. 2019(04)
[5]Uqcrc1的RNA干扰片段筛选及其对H9C2心肌细胞耐受缺氧/复氧损伤的影响[J]. 吴潇潇,李洪,易婷婷,杨天德. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(24)
[6]UQCRC1在结直肠癌及转移淋巴结中的表达[J]. 王宁,陈洋,姜奕. 世界华人消化杂志. 2012(03)
[7]Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:Role of mitochondria and reactive oxygen species[J]. Maria-Giulia Perrelli,Pasquale Pagliaro,Claudia Penna. World Journal of Cardiology. 2011(06)
[8]线粒体基因与核基因协同表达的机制[J]. 顾明亮,汪业军,陈姝,张永彪. 生命的化学. 2009(06)
[9]Protein profile of human hepatocarcinoma cell line SMMC-7721:Identification and functional analysis[J]. Yi Feng, Zhong-Min Tian, Ming-Xi Wan, Zhao-Bin Zheng The Key Laboratory of Biomedical Information Engineering of Ministry of Education, Department of Biomedical Engineering, School of Life Science and Technology, Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710049, Shaanxi Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2007(18)
[10]Mechanism of the protective effects of noninvasive limbs preconditioning on myocardial ischemia-reperfusion injury[J]. CHEN Xiao-guang, WU Bin-yang, WANG Jun-ke and BAI Tao Department of Anesthesiology, First Affiliated Hospital, China Medical Unive rsity, Shenyang 110001, China. Chinese Medical Journal. 2005(20)
本文编号：3429403
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