Lnc RNA MALAT1在骨肉瘤中的作用及调控机制研究

发布时间：2021-10-17 13:55

　　目的:研究骨肉瘤细胞Lnc RNA MALAT1的表达水平,探究Lnc RNA MALAT1通过HIF-1a及EZH2/β-catenin通路调控骨肉瘤发展的机制,以及通过下调MALAT1进而抑制骨肉瘤发展的可能性。方法:体外实验,（1）我们采用MNNG/HOS骨肉瘤细胞株,RT-PCR检测Lnc RNA MALAT1的表达。（2）通过siMALAT1,mTOR抑制剂雷帕霉素、激动剂MHY1485,HIF-1a抑制剂BAY87-2243,在常氧和CoCL₂模拟缺氧环境条件下,运用western blot、RT-PCR、ELISA等技术,检测骨肉瘤细胞MALAT1、mTOR磷酸化、HIF-1a、VEGF-A、FGF2表达水平。采用前述多种干预条件下的骨肉瘤细胞培养基处理HMEC-1细胞,通过CCK8实验、Transwell实验、小管形成实验,检测HMEC-1细胞的增殖、迁移、成管能力,揭示该环路调控骨肉瘤细胞促血管新生的机制。（3）采用siMALAT1及GSK343抑制MALAT1及EZH2,通过CCK8实验、Transwell实验、流式细胞仪检测两者对骨肉瘤细胞增... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

LncRNAMALAT1/mTOR/HIF-1a环与骨肉瘤细胞（Fig1.MALAT1/mTOR/HIF-1aloopinOScells）

LncRNAMALAT1在骨肉瘤中的作用及调控机制研究42图2.LncRNAMALAT1/mTOR/HIF-1a环与骨肉瘤细胞促血管化（Fig2.Pro-angiogenicactivityofMALAT1/mTOR/HIF-1aloopinOS）。（A）ELISA检测低氧、siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485与BAY87-2243对骨肉瘤细胞分泌FGF2及VEGF-A的影响（B）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485与BAY87-2243处理的骨肉瘤细胞分泌物培养基对血管内皮细胞AKT和ERK磷酸化的影响。（C）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485与BAY87-2243处理的骨肉瘤细胞分泌物培养基对血管内皮细胞增殖活性的影响。（D）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485与BAY87-2243

LncRNAMALAT1在骨肉瘤中的作用及调控机制研究45图3.siMALAT1通过抑制促血管效应抑制体内骨肉瘤生长（Fig3.Anti-angiogeniceffectofsiMALAT1invivo）。（A）siMALAT1抑制异位骨肉瘤体积生长。（B）siMALAT1抑制异位骨肉瘤Ki67表达，提示siMALAT1显著抑制骨肉瘤组织的细胞增殖。（C）siMALAT1促进异位骨肉瘤cleavedcaspase-3表达，提示siMALAT1促进骨肉瘤组织的细胞凋亡。（D）siMALAT1抑制异位骨肉瘤VEGF-A表达，提示siMALAT1抑制体内骨肉瘤组织的促血管能力。（E）siMALAT1抑制异位

【参考文献】：
期刊论文
[1]Hypoxia inducible factor（HIF） in the tumor microenvironment:friend or foe?[J]. Yanqing Huang,Daniel Lin,Cullen M.Taniguchi.  Science China（Life Sciences）. 2017(10)



本文编号：3441874