耐力运动经AMPK介导的自噬维持老年小鼠骨骼肌卫星细胞干细胞属性

发布时间：2021-10-28 20:02

　　目的探讨中等强度耐力运动对老年小鼠骨骼肌卫星细胞数量和功能的影响,以及AMPK信号介导的自噬在此过程中的作用,为探索肌肉衰减综合症的发病机制和防治方案提供理论依据。材料与方法将不同鼠龄的小鼠随机分为青年对照组（YC）、成年对照组（AC）、老年对照组（OC）、老年运动组（OE）,每组各12只。老年运动组小鼠的训练方案参照Bellafiore的研究,经过6周训练后,采用以下方法进行研究。（1）流式细胞分选技术,分离检测小鼠骨骼肌静止卫星细胞数量;免疫荧光染色实验检测肌卫星细胞标志物Pax7等在分选细胞中的表达,成肌诱导分化培养分选细胞并采用eMHC染色观察其形成肌管的能力;（2）对分选细胞P-AMPK及自噬相关蛋白LC3A/B,ATG12进行免疫荧光染色,并对其平均荧光强度进行统计分析;（3）Western Blot法检测C2C12成肌细胞AMPK通路相关蛋白、自噬相关蛋白（ATG12,Beclin1）的表达;透射电镜观察C2C12成肌细胞自噬小体形态;（4）注射肌肉毒素（20μl/10μɡ）法建立胫前肌损伤模型,组织学观察采用HE染色,免疫荧光染色实验检测成肌调节因子Myod、胚胎肌球蛋... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

耐力运动对小鼠骨骼肌衰减指数的影响

重庆医科大学研究生学位论文HE 染色结果显示: 老年对照组（OC）组小鼠胫前肌肌肉明显萎缩，主要表现为肌纤维密度减小，相对横截面积增大(图 2B)。统计结果显示: 老年对照组（OC）小鼠胫前肌肌纤维密度，与青年对照组（YC）相比显著下降 P<0.01(图 2D) ，相对横截面积显著增大 P<0.01(图 2E)；老年运动组（OE）肌纤维密度，与老年对照组（OC）相比显著增高 P<0.01(图 2D)，相对横截面积显著下降 P<0.01(图 2D)

图 3 肌卫星细胞细胞流式分选策略图（注：P1 和 P2 是在 FSC /SSC 散点图中设门圈活细胞群，排除凋亡细胞和碎片；P3 黑框内细胞群是表面标记为 CD45-/CD31-/ɑ7-Integrin＋的细胞，P4 黑框内的细胞群是在 P3 基础上选取的表面标记为 Sca-1-/ɑ7-Integrin＋细胞群即静止肌卫星细胞）2.3.2 骨骼肌卫星细胞的免疫荧光鉴定Pax7 蛋白为肌卫星细胞特有的转录因子，定位于胞核，是目前用于识别或鉴定静止卫星细胞最可靠的指标。分选的细胞经贴壁后行 Pax7 荧光染色同时以 DAPI标记细胞核，Pax7 在细胞核中阳性表达，即分离分选的单核细胞为肌卫星细胞，详见图 4。中间丝蛋白 Desmin 是肌原性前体细胞标志分子。本研究发现 Desmin 在细胞胞浆中阳性表达，可进一步确认分选出的细胞为肌卫星细胞，见图 4。

【参考文献】：
期刊论文
[1]耐力运动促进骨骼肌卫星细胞线粒体能量代谢及其对成肌分化的影响[J]. 薄海,王逊,陈啟祥,吉力立,张勇.  中国运动医学杂志. 2012(05)
[2]运动性骨骼肌适应的分子机制[J]. 马继政.  首都体育学院学报. 2009(02)



本文编号：3463281