人羊膜间充质干细胞膜片复合软骨微粒促进兔关节骨软骨缺损修复

发布时间：2021-10-29 14:49

　　目的:1)探讨应用一种简单的方法构建人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells）膜片,并研究其向成软骨细胞分化的潜能。2)探索同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损的可行性。3)探索hAMSCs膜片复合软骨微粒修复关节骨软骨缺损的可行性。方法:1)通过机械—酶消化法获得hAMSCs,应用流式细胞术和免疫荧光鉴定第三代细胞表型;后续研究采用第三代hAMSCs,体外定向诱导培养14天后,分别使用不同的检测方法观察其成骨、成脂分化的能力;CCK-8法检测hAMSCs增殖活性;取第三代hAMSCs分别构建hAMSCs膜片和成软骨诱导的hAMSCs膜片,扫描电镜（SEM）观察hAMSCs膜片结构特征和细胞分布。通过观察细胞形态、甲苯胺蓝染色以及IHC来评价成软骨诱导的hAMSCs膜片细胞向软骨细胞分化潜能;同时应用RT-qPCR和Western blot分析其成软骨相关基因（SOX9、COLⅡ、ACAN）和相应蛋白的表达。2)将获得的幼年贵州小香猪膝关节软骨微粒体外培养,分别在1、3、7天进行Brdu免疫荧光检测。将幼年小香猪膝关节软骨微粒复... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人羊膜间充质干细胞形态学观察（40×）

遵义医科大学硕士学位论文 尤奇2.2 人羊膜间充质干细胞鉴定及纯度分析取第三代人羊膜间充质干细胞进行流式细胞术检测，结果显示：CD44、CD73、CD90、CD105 高表达，表达率 99%以上，CD34、CD11B、CD19、CD45、HLA-DR阴性表达（图 2）。

遵义医科大学硕士学位论文 尤奇2.3 人羊膜间充质干细胞向骨细胞、脂肪细胞分化潜能检测人羊膜间充质干细胞经成骨诱导 14d 后，细胞体积增大，随着诱导时间的延长逐渐形成圆形的矿化结节，茜素红染色后可见红色沉淀。成脂诱导 14d 后，可见细胞体积增大，胞浆内可见空泡样结构，油红 O 染色可见红染的脂滴（图 3）。

【参考文献】：
期刊论文
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[2]同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损:问题及前景[J]. 尤奇,刘毅,段小军,杨柳,李豫皖,朱喜忠.  中国组织工程研究. 2017(34)
[3]细胞膜片技术在组织工程中的应用与研究进展[J]. 周术奎,张楷乐,王营,傅强.  中国组织工程研究. 2016(11)
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[7]保留钙化层结构的猪股骨滑车全厚软骨缺损模型建立[J]. 宁志刚,杨柳,王富友,张一,王恩洪.  中国修复重建外科杂志. 2012(05)
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本文编号：3464861