七氟烷通过抑制Grp78的表达减轻大鼠肝缺血再灌注损伤
发布时间：2021-11-01 15:56
目的研究七氟烷预处理在肝缺血再灌注的作用及其潜在机制是否与Grp78的表达相关。方法选取雄性大鼠24只,平均重量240±15克,饲养一周后,随机分为三组:对照假手术组（Sham组）,模型组（I/R组）,七氟烷组（SEV组）。对照组麻醉后仅进行剖腹及二次剖腹,不进行肝脏缺血再灌注处理,I/R组和SEV组建立大鼠肝脏缺血再灌注模型。SEV组使用七氟烷预先处理,完成手术后,采集三组大鼠腔静脉血液样本,离心获得上层液。迅速采集肝脏样本,使用0.9%盐水与100g肝组织制成10%匀浆。通过酶联免疫法测定血清中TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6的浓度。使用检测盒测定肝均质中丙二醛（MDA）,超氧化物异变酶（SOD）和一氧化氮（NO）的含量。使用HE染色、末端标记法和免疫组化等方式观察细胞损伤程度、细胞凋亡及Grp78的表达。培养小鼠胚胎肝细胞BNLCL.2,在细胞对数生长阶段收集细胞,根据不同方式分为对照组（Control组）、模型组（I/R组）和七氟烷组（SEV组）。使用糖氧剥夺方式建立了肝细胞缺血再灌注模型,SEV组预先使用七氟烷处理,收集细胞并进行细胞转染。转染后,对照组细胞分为s...
【文章来源】：锦州医科大学辽宁省
【文章页数】：39 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
七氟烷减少肝损害程度，肝细胞凋亡和葡萄糖蛋白78的表达注：A：通过HE染色检查肝脏损伤程度；B：通过末端标记法检测细胞凋亡；C：通过免疫法检测Grp78的表达
图 2 三组 TNF -α、IL-1β、IL-10 和 IL-6 浓度，MDA,SOD,和 NO 的浓度注：A：通过 ELISA 免疫法检测 TNF-α、IL-1β、IL-10 和 IL-6 的浓度；B：检测 MDA、SOD 和 NO。**p<0.01 与假组相比；#p<0.05 或##p<0.01 与 I/R 组相比。三、七氟醚降低缺血再灌注后BNL CL.2细胞凋亡和Grp78的表达，PERK，eIF2α，p-c-JNK/JNK流式细胞仪检测细胞凋亡表明，与对照组相比，I / R 组细胞凋亡率明显提高（P<0.01）。虽然 SEV 组的凋亡率仍高于对照组，与 I / R 组相比，凋亡率显著降低（P<0.01），说明了这一点七氟烷预处理可显著减少缺血再灌注引起的细胞凋亡（图 3A）。此外，蛋白质印迹分析还显示，三组细胞中 JNK 的表达没有明显差异。然而，与对照组相比 I / R 组中的 Grp78、PERK、eIF2α 和 p-c-JNK 表达显着升高（P<0.01）。另外，与 I / R 组相比，SEV 组中 Grp78，PERK 的表达，以及 eIF2α 和 p-c-JNK 显著降低（P<0.01）（图 3B）。结果提示七氟烷预处理对 JNK的表达没有影响，但明显降低了 Grp78，PERK 的表达，eIF2α 和 p-c-JNK。
图 3 七氟烷降低缺血再灌注后 BNLCL.2 细胞凋亡和 Grp78 的表达，PERK，eIF2α，p-c-JNK / JNK注：A：流式细胞术检测细胞凋亡；B：Western 检测 Grp78、PERK、eIF2α、p-c-JNK JNK 表达，蛋白质印迹的分子量如下：Grp78，72kda；PERK，125kda；eIF2α，36kda；-c-JNK，46-54kda；JNK，48kda；GAPDH，36kda。**p<0.01 与对照组比较；##p<0.01 I/R 对照组比较。、七氟烷可以通过抑制 Grp78 的表达减少细胞凋亡和 PERK、IF2α 的表达，p-c-JNK / JNK转染后，siGrp78 组 BNLCL.2 细胞中 siGrp78 mRNA 和蛋白表达显着低于iNC 组（P<0.01）（图 4A，B）。我们还可以观察到，对于 siNC 组，I / R + siNC和 I / R + siNC + SEV 组的细胞，I / R + siNC 组凋亡率显着高于 siNC 组P<0.01）。与 I / R + siNC 相比，I / R + siNC + SEV 组的细胞凋亡率低得多P<0.01）。另外，与 siGrp78 组相比，I / R + siGrp78 组细胞凋亡率显着增加
本文编号：3470386
【文章来源】：锦州医科大学辽宁省
【文章页数】：39 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
七氟烷减少肝损害程度，肝细胞凋亡和葡萄糖蛋白78的表达注：A：通过HE染色检查肝脏损伤程度；B：通过末端标记法检测细胞凋亡；C：通过免疫法检测Grp78的表达
图 2 三组 TNF -α、IL-1β、IL-10 和 IL-6 浓度，MDA,SOD,和 NO 的浓度注：A：通过 ELISA 免疫法检测 TNF-α、IL-1β、IL-10 和 IL-6 的浓度；B：检测 MDA、SOD 和 NO。**p<0.01 与假组相比；#p<0.05 或##p<0.01 与 I/R 组相比。三、七氟醚降低缺血再灌注后BNL CL.2细胞凋亡和Grp78的表达，PERK，eIF2α，p-c-JNK/JNK流式细胞仪检测细胞凋亡表明，与对照组相比，I / R 组细胞凋亡率明显提高（P<0.01）。虽然 SEV 组的凋亡率仍高于对照组，与 I / R 组相比，凋亡率显著降低（P<0.01），说明了这一点七氟烷预处理可显著减少缺血再灌注引起的细胞凋亡（图 3A）。此外，蛋白质印迹分析还显示，三组细胞中 JNK 的表达没有明显差异。然而，与对照组相比 I / R 组中的 Grp78、PERK、eIF2α 和 p-c-JNK 表达显着升高（P<0.01）。另外，与 I / R 组相比，SEV 组中 Grp78，PERK 的表达，以及 eIF2α 和 p-c-JNK 显著降低（P<0.01）（图 3B）。结果提示七氟烷预处理对 JNK的表达没有影响，但明显降低了 Grp78，PERK 的表达，eIF2α 和 p-c-JNK。
图 3 七氟烷降低缺血再灌注后 BNLCL.2 细胞凋亡和 Grp78 的表达，PERK，eIF2α，p-c-JNK / JNK注：A：流式细胞术检测细胞凋亡；B：Western 检测 Grp78、PERK、eIF2α、p-c-JNK JNK 表达，蛋白质印迹的分子量如下：Grp78，72kda；PERK，125kda；eIF2α，36kda；-c-JNK，46-54kda；JNK，48kda；GAPDH，36kda。**p<0.01 与对照组比较；##p<0.01 I/R 对照组比较。、七氟烷可以通过抑制 Grp78 的表达减少细胞凋亡和 PERK、IF2α 的表达，p-c-JNK / JNK转染后，siGrp78 组 BNLCL.2 细胞中 siGrp78 mRNA 和蛋白表达显着低于iNC 组（P<0.01）（图 4A，B）。我们还可以观察到，对于 siNC 组，I / R + siNC和 I / R + siNC + SEV 组的细胞，I / R + siNC 组凋亡率显着高于 siNC 组P<0.01）。与 I / R + siNC 相比，I / R + siNC + SEV 组的细胞凋亡率低得多P<0.01）。另外，与 siGrp78 组相比，I / R + siGrp78 组细胞凋亡率显着增加
本文编号：3470386
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