肽基凝胶诱导NT-3基因修饰BMSCs向神经细胞分化研究

发布时间：2017-05-06 08:12

  本文关键词：肽基凝胶诱导NT-3基因修饰BMSCs向神经细胞分化研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的:构建体外脊髓组织工程模块,探讨在含IKVAV肽基凝胶三维培养下,NT-3基因修饰的BMSCs向神经细胞分化情况。研究方法:1、采用全骨髓贴壁法分离、培养细胞,进行形态学观察、流式细胞术表面抗原检测、观察其向成脂方向诱导分化,CCK-8绘制细胞生长曲线。2、使用NT-3过表达腺病毒(Ad-NT-3-RFP)对BMSCs进行基因修饰,48h后荧光显微镜下观察标记蛋白RFP在转染后BMSCs中表达情况,ELISA法检测修饰后BMSCs NT-3蛋白表达情况。3、通过含细胞的培养液促发多肽溶液自组装形成三维培养体系,实验分成三组:凝胶-NT3组(经NT-3病毒转染后三维培养)、凝胶-RFP组(经RFP对照病毒转染后三维培养)、NT-3组(只经NT-3病毒转染)。运用qRT-PCR及Western blot检测各组BMSCs细胞中MAP-2、GFAP mRNA及蛋白表达水平。研究结果:1、分离获取的BMSCs呈梭行,流式细胞测定显示细胞高表达CD29,不表达CD34,经成脂诱导2周出现脂滴,油红O染色成红色。2、使用Ad-NT-3-RFP转染BMSCs 48h后,细胞中出现明显的RFP表达,细胞转染效率均在90%以上。ELISA检测细胞培养液中NT-3含量,细胞液中第1天就开始出现NT-3蛋白,第3天NT-3蛋白浓度明显升高。到第5天后,每天培养液中NT-3蛋白浓度未出现明显差异。3、qRT-PCR和Western blot结果显示:凝胶-NT3组中MAP-2、GFAP mRNA及蛋白表达水平较凝胶-RFP组和NT-3组明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:含IKVAV肽基凝胶具有明显诱导NT-3基因修饰的BMSCs向神经细胞分化的作用。
【关键词】：组织工程模块 BMSCs NT-3 IKVAV 肽基凝胶 神经分化
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 材料与方法11-23
• 2.1 材料11-14
• 2.1.1 SD大鼠11
• 2.1.2 细胞11
• 2.1.3 腺病毒来源11
• 2.1.4 多肽来源11
• 2.1.5 主要试剂和实验设备11-13
• 2.1.6 主要溶液的配制13-14
• 2.2 实验方法14-23
• 2.2.1 BMSCs分离及培养14
• 2.2.2 骨髓间充质干细胞鉴定14-15
• 2.2.3 细胞生长曲线测定（CCK-8）比色法15-16
• 2.2.4 腺病毒转染BMSCs及相关蛋白检测16-17
• 2.2.5 脊髓组织工程模块构建及细胞分化检测17-21
• 2.2.6 统计学处理21-23
• 第3章 实验结果23-30
• 3.1 BMSCs的培养与传代23-24
• 3.2 流式细胞仪检测BMSCs表面标记抗原CD29、CD34的表达24
• 3.3 BMSCs的成脂诱导和油红染色结果24-25
• 3.4 BMSCs生长曲线25
• 3.5 病毒转染后红色荧光蛋白表达情况25-26
• 3.6 ELISA检测转染后BMSCs NT-3表达情况26
• 3.7 多肽分子检测及自组装结果26-27
• 3.8 BMSCs神经分化检测27-30
• 3.8.1 BMSCs形态学观察27-28
• 3.8.2 BMSCs神经分化后神经标志物q RT-PCR结果28-29
• 3.8.3 BMSCs神经分化后神经标志物Western-Blot结果29-30
• 第4章 讨论30-34
• 第5章 结论与展望34-35
• 5.1 结论34
• 5.2 展望34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-38
• 攻读学位期间的研究成果38-39
• 综述 脊髓组织工程研究进展39-48
• 参考文献45-48

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本文编号：348052