Spastin的SUMO修饰介导微管动力调控海马神经元生长发育

发布时间：2021-11-10 02:14

　　目的:探讨spastin能否进行SUMO（Small ubiquitin-like modifiers）化修饰及SUMO化修饰如何调控微管动态性从而影响神经元生长发育。方法:首先,用pull down、Co-IP、免疫细胞荧光染色及BIFC的方法检测spastin在体内外是否与SUMO结合。通过软件预测spastin潜在的SUMO化位点,并通过免疫荧光化学和分子实验鉴定spastin的SUMO化修饰位点。然后,根据突变位点构建的突变体质粒转染神经元,细胞免疫荧光化学观察神经元突起生长的变化。将spastin与SUMO1或SENP1共转COS1细胞,确定不同spastin SUMO化修饰状态对微管切割的影响。用免疫荧光染色的方法分析spastin K427R如何影响微管的动态性;接下来过表达spastin K427R观察spastin K427R促进或抑制微管的修饰,并确定其对海马神经元生长的影响;最后,通过免疫细胞化学染色观察spastin对不同修饰状态下微管切割活性的影响,确定spastin对不同修饰状态的海马神经元突起生长的影响。结果:（1）Pull down及Co-IP实验显示,... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

脊髓损伤后新生侧枝再生模式

图 2 微管的结构。（引自 Westermann S, Weber K. Post-translational modificationregulate microtubule function[J]. Nature Reviews Molecular Cell Biology, 20034(12):938-47.）3.2 微管 C 末端是微管翻译后修饰的重要结构微管蛋白α和β单体由约450个氨基酸残基组成，分子量为55kDa。微管蛋白结构紧凑，总长度约为8nm，可分为三个功能区：氨基端区(N端)、中间区和羧基端区(C端)[25]。N末端区域包含氨基酸残基1-205，不同的微管蛋白亚型在该区域有40%同源性，N末端区域的一个特殊性是存在一个三磷酸鸟苷(GTP)的单一结合位点，这是介导微管动力学所必需的[26-28]。中间结构域对应于206-381个残基，包括一个蛋白酶敏感位点，该区域还含有一个与β-微管蛋白亚型有关的MT稳定剂紫杉醇的结合位点[29]。C末端区域位于微管表面向外的区域，使其易于微管蛋白翻译后修饰(PTMS)和与微管相关蛋白进行相互作用，从而调节微管的功

T组织和翻译后修改的示意图。MTS为长而直的空心圆柱体，主要原丝组成。它们通过添加αβ-微管蛋白的杂二聚体进行聚合，它们式聚集在一起。MTS是极性结构，具有快速生长的正端(β-微管蛋(α-微管蛋白暴露)。微管蛋白的翻译后修饰在MT的同一性中产生了


本文编号：3486365