转录因子E2F1调节脂肪间充质干细胞的旁分泌功能及其促进皮肤创面愈合的研究
发布时间：2021-11-12 00:20
目的:探索E2F1对脂肪间充质干细胞（Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs）旁分泌功能的影响,E2F1-/-ADSCs对小鼠创面愈合进程的作用及其相关的作用机制。方法:选取6-8周龄野生型（WT）和E2F1基因敲除(E2F1-/-)小鼠,分离培养WT ADSCs和E2F1-/-ADSCs,培养至第4代（P4）,显微镜下观察比较两组细胞形态,并采用流式细胞术对ADSCs相关特异性表面标志物分子进行鉴定,经成脂分化诱导,行油红O染色。建立WT小鼠背部全层皮肤缺损创面模型,实验设置为三组,分别给予:（1）磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）注射;（2）WT ADSCs;（3）E2F1-/-ADSCs。记录不同愈合时段（0 d、3 d、7 d、10d、14 d）创面愈合情况,并计算各组创面愈合率,比较各组在不同时间点创面愈合速度的差别;术后14天,HE染色观察并比较各组愈合情况;Masson染色评估各组创面新生皮肤组织胶原沉积情况。Ki67（绿色荧光）与CD31（红色）免疫荧光染...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
WT和E2F1-/-小鼠鼠尾DNA琼脂糖凝胶电泳图：条带4为WT小鼠（172bp），条带1、3、6-8均为E2F1-/-小鼠（227bp），条带2和5为杂合子小鼠（172bp&227
图 2：P4 代 E2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 细胞显微镜观察1-/-ADSCs 和 WTADSCs 流式鉴定流式细胞术对 WTADSCs 和 E2F1-/-ADSCs 进行分析，结果显示，E2F1-/、 CD44、 CD90 、CD31 表达率分别为：99.9% 、96.4%、 99.9%、 0，在 WTADSCs 表达率分别为：100%、96.8%、99.9%、0.19%。结果胞均高表达间充质干细胞表面标志物 CD29、CD44 和 CD90，低表达血面标志物 CD31，符合 ADSCs 的表型特征（图 3）。
图 3： E2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 流式表型2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 均具有成脂分化能力在 ADSCs 成脂诱导培养基的环境下，两组 ADSCs 细胞包浆由梭形逐变大变渐可在镜下观察到折光性小脂滴。诱导第 14 天，脂滴逐渐增多，形态变大而 O 染色可见细胞内脂滴颗粒被红染，呈亮红色葡萄串样颗粒，提示细胞已成化为成熟的脂肪细胞（图 4）。
本文编号：3489831
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
WT和E2F1-/-小鼠鼠尾DNA琼脂糖凝胶电泳图：条带4为WT小鼠（172bp），条带1、3、6-8均为E2F1-/-小鼠（227bp），条带2和5为杂合子小鼠（172bp&227
图 2：P4 代 E2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 细胞显微镜观察1-/-ADSCs 和 WTADSCs 流式鉴定流式细胞术对 WTADSCs 和 E2F1-/-ADSCs 进行分析，结果显示，E2F1-/、 CD44、 CD90 、CD31 表达率分别为：99.9% 、96.4%、 99.9%、 0，在 WTADSCs 表达率分别为：100%、96.8%、99.9%、0.19%。结果胞均高表达间充质干细胞表面标志物 CD29、CD44 和 CD90，低表达血面标志物 CD31，符合 ADSCs 的表型特征（图 3）。
图 3： E2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 流式表型2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 均具有成脂分化能力在 ADSCs 成脂诱导培养基的环境下，两组 ADSCs 细胞包浆由梭形逐变大变渐可在镜下观察到折光性小脂滴。诱导第 14 天，脂滴逐渐增多，形态变大而 O 染色可见细胞内脂滴颗粒被红染，呈亮红色葡萄串样颗粒，提示细胞已成化为成熟的脂肪细胞（图 4）。
本文编号：3489831
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