FASN激活pERK1/2/Bcl-xl通路介导细胞“失巢凋亡抵抗”促进骨肉瘤转移
发布时间：2021-11-20 08:31
研究背景与目的:骨肉瘤（osteosarcoma）是最常见的骨恶性肿瘤,肺转移是其致死的重要原因。研究表明,细胞失巢凋亡抵抗是促进肿瘤转移的重要因素,但是,失巢凋亡抵抗促进骨肉瘤肺转移的机制尚不明确。我们前期实验研究显示,FASN在骨肉瘤合并肺转移患者中高表达。在本研究中,我们探索FASN在骨肉瘤失巢凋亡抵抗促进肺转移的作用及其分子机制。研究方法:1、骨肉瘤细胞（143B、MG-63、Saos-2）与正常成骨细胞（hFOB1.19）抗失巢凋亡能力的研究:采用台盼蓝细胞染色检测细胞失巢状态下的存活率,采用克隆形成实验检测细胞失巢后克隆形成能力,采用流式细胞术检测细胞失巢凋亡率,比较骨肉瘤及正常成骨细胞的失巢凋亡抵抗能力。2、FASN在骨肉瘤细胞抗失巢凋亡中的作用:在骨肉瘤细胞（143B、MG-63、Saos-2）与正常成骨细胞（hFOB1.19）中,采用Western-blot、qPCR、ICC检测FASN及pERK1/2、Bcl-xl表达水平。探索FASN/pERK1/2/Bcl-xl分子信号通路在骨肉瘤细胞失巢凋亡中的作用。3、改变FASN表达,验证FASN在失巢凋亡抵抗中的作用及机...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
4种细胞悬浮0、2、4、6天的细胞存活率
图 1B&C 4 种细胞悬浮培养 7 天后贴壁细胞克隆形成率。Figure1B&C The colony formation rate of four cell lines after suspended culture for 7 days.**：p＜0.01，两组间比较，差异具有显著统计学意义。3.1.3 悬浮培养 143B、MG-63、Saos-2、hFOB1.19 细胞，骨肉瘤细胞失巢凋亡率低于正常成骨细胞。我们将骨肉瘤细胞株 143B、MG-63、Saos-2 和非肿瘤细胞（正常成骨细胞hFOB 1.19 在低贴壁的培养板中进行悬浮培养，悬浮培养 48h 后，使用流式细胞仪检测细胞凋亡率 (图 1D&E)。结果显示(图 1D&E)：悬浮培养 48h 后，肿瘤细胞 143B(13.33±0.88)、MG-63(27.67±1.45) 凋 亡 率 明 显 低 于 hFOB1.19(41.33±1.856) 和Saos-2(38.67±1.8±56)。这一结果进一步提示，肿瘤细胞 143B 和 MG-63 具有很强抗失巢凋亡能力。
图 1D&E 4 种细胞悬浮培养 48h 检测细胞凋亡率Figure1D&E The apoptotic rate of four cell lines after suspended culture for 48h.*：p＜0.05，两组间比较，差异具有统计学意义。**：p＜0.01，两组间比较，差异具有显著统计学意义。3.1.4 悬浮培养 143B、MG-63、Saos-2、hFOB1.19 细胞，检测促凋亡蛋白 c-Caspases3 表达量。我们将骨肉瘤细胞株 143B、MG-63、Saos-2 和非肿瘤细胞（正常成骨细胞）hFOB 1.19 分别种植普通培养板/低贴壁的培养板中进行贴壁/悬浮培养，培养 48h后，western-blot 检测贴壁和悬浮状态下各细胞 c-Caspases3 表达量 (图 1F)。结果显示(图 1F)：贴壁培养状态下，4 种细胞中 c-Caspases3 表达量均低。悬浮培养状态下，非肿瘤细胞 hFOB1.19 中 c-Caspases3 表达量最高，肿瘤细胞中，Saos-2 表达最高, 其次为 MG-63，143B 细胞表达量最低。这提示，高增殖
【参考文献】：
期刊论文
[1]凋亡抑制基因Bcl-xL的研究进展[J]. 郭文娟,王爱英. 世界华人消化杂志. 2008(25)
博士论文
[1]miRNA-200b影响失巢凋亡的机制及其表达的自我调节[D]. 张绪森.北京协和医学院 2013
本文编号：3506954
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
4种细胞悬浮0、2、4、6天的细胞存活率
图 1B&C 4 种细胞悬浮培养 7 天后贴壁细胞克隆形成率。Figure1B&C The colony formation rate of four cell lines after suspended culture for 7 days.**：p＜0.01，两组间比较，差异具有显著统计学意义。3.1.3 悬浮培养 143B、MG-63、Saos-2、hFOB1.19 细胞，骨肉瘤细胞失巢凋亡率低于正常成骨细胞。我们将骨肉瘤细胞株 143B、MG-63、Saos-2 和非肿瘤细胞（正常成骨细胞hFOB 1.19 在低贴壁的培养板中进行悬浮培养，悬浮培养 48h 后，使用流式细胞仪检测细胞凋亡率 (图 1D&E)。结果显示(图 1D&E)：悬浮培养 48h 后，肿瘤细胞 143B(13.33±0.88)、MG-63(27.67±1.45) 凋 亡 率 明 显 低 于 hFOB1.19(41.33±1.856) 和Saos-2(38.67±1.8±56)。这一结果进一步提示，肿瘤细胞 143B 和 MG-63 具有很强抗失巢凋亡能力。
图 1D&E 4 种细胞悬浮培养 48h 检测细胞凋亡率Figure1D&E The apoptotic rate of four cell lines after suspended culture for 48h.*：p＜0.05，两组间比较，差异具有统计学意义。**：p＜0.01，两组间比较，差异具有显著统计学意义。3.1.4 悬浮培养 143B、MG-63、Saos-2、hFOB1.19 细胞，检测促凋亡蛋白 c-Caspases3 表达量。我们将骨肉瘤细胞株 143B、MG-63、Saos-2 和非肿瘤细胞（正常成骨细胞）hFOB 1.19 分别种植普通培养板/低贴壁的培养板中进行贴壁/悬浮培养，培养 48h后，western-blot 检测贴壁和悬浮状态下各细胞 c-Caspases3 表达量 (图 1F)。结果显示(图 1F)：贴壁培养状态下，4 种细胞中 c-Caspases3 表达量均低。悬浮培养状态下，非肿瘤细胞 hFOB1.19 中 c-Caspases3 表达量最高，肿瘤细胞中，Saos-2 表达最高, 其次为 MG-63，143B 细胞表达量最低。这提示，高增殖
【参考文献】：
期刊论文
[1]凋亡抑制基因Bcl-xL的研究进展[J]. 郭文娟,王爱英. 世界华人消化杂志. 2008(25)
博士论文
[1]miRNA-200b影响失巢凋亡的机制及其表达的自我调节[D]. 张绪森.北京协和医学院 2013
本文编号：3506954
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