机械敏感离子通道Piezo1及驱动蛋白Kif18A影响骨关节炎软骨细胞增殖的机制

发布时间：2021-11-26 10:38

　　目的 探究机械敏感离子通路Piezo1是否通过调控驱动蛋白Kif18A表达改变细胞骨架蛋白进而影响细胞的分裂增殖。方法 制备干扰Piezo1表达的FAM38A-sh RNA慢病毒载体,体外转染骨关节炎患者软骨细胞,筛选有效干扰Piezo1表达的序列作为慢病毒载体干扰组（C组）,同时设立空白对照组（A组）、慢病毒空载体组（B组）、慢病毒干扰序列（LV3-Pie zo1-homo-3201）组（C组）、Kif18A药物阻断组（D组）、慢病毒干扰序列（LV3-Piezo1-homo-3201）+Kif18A药物阻断组（E组）。根据预实验获得的预知结果用多通道细胞机械牵张应力加载系统FX-4000T分别周期作用各组实验细胞组0h、2h、12 h、24 h、48 h。在光学显微镜下在不同时间观察细胞形态变化,采用cck8试剂盒测定细胞增殖,RT-PCR和Western-Blot检测相关基因Piezo1、β-tubulin、Ki f18A的转录和蛋白翻译表达水平。结果 慢病毒干扰载体LV3-Piezo1-homo-3201序列组Piezo1目的基因相对表达量明显下降,干扰效果显著（P<0.0... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

带有ZsGreen荧光和puro抗性基因标记h-PIEZO1干扰慢病毒载体

细胞多呈细长梭形，排列紧密，部分细胞呈多角形，单核，个别细胞变修长形并出现丝状触角，为老化现象。（图2）。图 2 倒置光学显微镜下细胞的形态（100×），不同时间点下细胞数目和形态不同。数目不断增长，形态由多边形向梭形变化。1.2 免疫组织化学染色免疫组织化学染色结果示软骨细胞胞质染成黄褐色，细胞核复染成蓝色，表示软骨细胞胞质内有Ⅱ型胶原蛋白(图 3)。

染色结果（200×），软骨细胞胞质染成黄褐色，细胞核复染成蓝色蓝染色甲苯胺蓝染色来鉴别软骨细胞，因存在于软骨细胞的蛋白多料甲苯胺蓝染成蓝紫色，本实验结果可见软骨细胞胞质呈紫 4），可知软骨细胞产生蛋白多糖。


本文编号：3519975