PTH联合BMSCs治疗去势大鼠骨质疏松椎体的实验研究

发布时间：2021-11-28 21:09

　　目的:去势法构建大鼠骨质疏松模型;分离、培养、鉴定、诱导分化及使用USPIO标记大鼠BMSCs;BMSCs植入大鼠椎体后通过MRI进行示踪,最后使用Micro-CT测定和观察PTH与BMSCs在骨质疏松大鼠椎体内的成骨效果。方法:1.将50只大鼠随机分为假手术组（SHAM,n=10）与骨质疏松造模组（OVX,n=40）。OVX组切除双侧卵巢,建立骨质疏松模型;SHAM组切除卵巢周围脂肪组织,大小与卵巢类似。12w后用大鼠雌激素ELISA试剂盒分别检测两组大鼠的血清雌激素水平与腰6椎体相关骨性指标。2.选择全贴壁法体外分离、培养、代增BMSCs,经流式细胞技术鉴定所提取细胞是否为BMSCs。鉴定后进行BMSCs的成骨诱导分化并行碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定。3.通过PLL转染的USPIO标记BMSCs,普鲁士蓝染色法证明标记成功。转染后行BMSCs增殖能力测定,MTT相关计算软件绘制生长曲线;台盼蓝拒染法检测细胞活性。4.将SHAM组记为A组,OVX组随机分为B、C、D、E组,每组10只。A、B组不做任何处理,C组按60μg/kg剂量背部皮下注射Rat PTH 1-34,隔日1次,连续... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

骨质疏松大鼠模型的建立

BMSCs 接种于 25cm2细胞培养瓶后，细胞略呈淡黄色半透明状类圆形，密集重叠悬浮于完全培养基中。24h 后观察可见部分细胞贴壁，48h 半量换液后光镜下可见培养瓶底部有少量梭形细胞，高倍镜下核仁清晰可见；3d 后再次换液可见密集的细胞团，呈漩涡状（如图 2-1 所示）。传代后细胞贴壁较原代快，形态均匀，生长迅速。原代 BMSCs 40× 原代 BMSCs 100×

图 2-2 大鼠 BMSCs 的流式细胞技术鉴定MSCs 的成骨诱导鉴定SCs 成骨诱导分化约 10d 后，行碱性磷酸酶染色，可见深蓝色至灰黑（如图 2-3 所示）；诱导分化约 21d 后行茜素红染色，光镜下可见细胞图 2-4 所示），反应阳性，证明成骨诱导成功。

【参考文献】：
期刊论文
[1]甲状旁腺激素对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化中LPL和ALP的影响[J]. 高飞,林梅,葛志敏,郭中豪.  中国骨质疏松杂志. 2015(12)
[2]不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生长增殖及生物学特性的影响[J]. 马力,刘大军,李德天,刘沛田,边小慧.  中国组织工程研究与临床康复. 2008(38)
[3]骨髓基质干细胞的标记示踪技术及其应用[J]. 许剑,徐格林,刘新峰.  中国临床神经科学. 2006(02)



本文编号：3525144