琥珀酸盐对移植肝脏缺血再灌注损伤作用的实验研究

发布时间：2021-12-12 02:25

　　目的:肝脏移植是终末期肝病唯一有效的治疗手段。然而供体的短缺严重制约了肝移植手术的开展,大量等待肝脏移植的患者在等待过程中失去了治疗机会。为了解决供体的短缺,欧美移植中心重新关注并开始越来越多的利用心脏死亡供体（Donation after cardiac death,DCD）。然而与脑死亡供体（Donation after brain death,DBD）相比,DCD经历了热缺血损伤,更容易出现原发性移植物无功能（primary non-function,PNF）、早期移植物功能不良（poor early graft function,PEGF）以及缺血性胆道疾病等并发症。在我国,由于没有脑死亡标准的法律规定,DCD成为了我国器官捐献最主要的来源。因此,如何减轻肝脏的缺血再灌注损伤,同时对供肝的质量进行评估以决定是否使用,是目前肝脏移植研究中的重中之重。缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion?injury,IRI）是肝移植术后导致器官丢失的主要原因。IRI的机制包括:氧自由基爆发、细胞内钙超载、酸中毒、炎性细胞反应等,而其中氧自由基爆发被认为是启动因素,在缺血再灌注... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

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大鼠肝移植情况

中国医科大学博士学位论文9图1-2大鼠肝移植学习曲线/生存曲线2.3.2研究指标及方法2.3.2.1手术基本情况记录所有大鼠的重量，受体手术时间，无肝期时间，准确的冷保存时间。2.3.2.2琥珀酸盐含量测定假手术组开腹后先游离肝周韧带，结扎切取肝乳头叶1，脾静脉持续注射生理盐水10min，60min后分别结扎切取肝乳头叶2，肝三角叶，24h后切取肝左外叶，分别置入-80°C液氮保存，左外叶切取一块快速置于10%的中性甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋。各移植组于缺血前切取肝乳头叶1，置入-80°C液氮保存，脾静脉持续注射药物后经历热缺血60min和冷保存2h切取肝乳头叶2，置入-80°C液氮保存，受体门静脉通血后1h结扎切取肝三角叶，置入-80°C液氮保存，受体门静脉通血后24h切取肝左外叶，置入-80°C液氮保存。测定方法参照文献[21]，测定原理：通过琥珀酰辅酶A合成酶（SCS），丙酮酸激酶（PK），L-乳酸脱氢酶（L-LDH）等酶催化反应的酶分析法测定。（1）在琥珀酰辅酶A合成酶（SCS）的催化下，琥珀酸盐（Succinate）、三磷酸腺苷（ATP）和辅酶A（CoA）发生反应，生成琥珀酰辅酶A（succinyl-CoA）、二磷酸腺苷（ADP）和磷酸（Pi）。（2）在丙酮酸激酶（PK）的催化下，ADP和磷酸烯醇丙酮酸盐（PEP）反应生成ATP和丙酮酸盐（pyruvate）。

中国医科大学博士学位论文14TBS洗一次，10分钟。5）化学发光在工作台上铺一张保鲜膜，将PVDF膜放在保鲜膜上。将化学发光的A和B两种试剂在EP管内等体积混合，然后均匀滴在PVDF膜的蛋白面，反应2分钟后，将PVDF膜上多余的发光工作液吸干，之后转移到灰度仪中。6）凝胶图象分析将胶片进行拍照，用凝胶图象处理系统分析光密度值，进行条带灰度值测定，以与内参的比值作为相对表达量。2.3.2.8统计学方法应用SPSS20.0软件进行统计学分析。使用Shapiro-Wilk鉴定数据是否符合正态分布。根据正态分布测试（Shapiro–Wilktest），计数资料使用平均值±标准差（mean±SD）来表示。所有连续数据使用StudentNewman-Keul’s检验和Studentt检验进行检测。每两组之间的比较使用单因素方差分析One-WayANOVA。以P＜0.05为差异具有统计学意义。对荧光显微镜观察的染料或荧光强度采用ImageJ图像分析系统进行分析处理。图片使用GraphPrism7.0制作。3结果3.1大鼠肝脏缺血各时期琥珀酸盐量的变化图1-3大鼠肝脏缺血各时期琥珀酸盐量的变化：与热缺血0min比较，P<0.05；#：与热缺血30min相比，P<0.05；&：与热缺血60min


本文编号：3535833