乙醛脱氢酶2激动剂Alda-1在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

发布时间：2021-12-19 02:22

　　肝脏移植是治疗终末期肝脏疾病的最常用且最有效的治疗手段,而肝脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)是肝移植过程中不可避免的病理生理过程,常常会导致严重的移植后并发症,且极大的限制了边缘性供肝的有效利用,因此解决或减轻肝脏IRI,将会使移植后患者和等待移植患者受益。ALDH2(acetaldehyde dehydrogenase 2,乙醛脱氢酶2)是一种醛脱氢酶,其在病理生理状态下,能将外源性和内生性的高毒性醛类氧化成低毒性的乙酸,从而发挥重要的生理功能。近来,已有研究表明ALDH2在氧化应激,乙醇相关疾病中发挥重要的作用。然而,其在肝脏缺血再灌注过程中的作用尚未报道。本研究旨在探讨激活ALDH2对肝脏IRI的保护作用及相关机制研究。第一部分在小鼠的肝脏IRI模型中,通过采用Q-PCR、Western blot、酶活性检测、免疫组织化学等方法,检测肝脏组织中的ALDH2的mRNA和蛋白水平变化,我们发现IRI并不能引起ALDH2的表达变化和分布,进一步检测发现IRI使ALDH2的酶活性明显减低,造成大量的毒性醛类物质的聚集。进一步研究表明应用A...

【文章来源】： 上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：88 页

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摘要
ABSTRACT
中英文缩写字母表
绪论
第一章 ALDH2 在肝脏缺血再灌注损伤中的表达变化
    1.1 引言
    1.2 实验材料
        1.2.1 实验动物
        1.2.2 实验仪器及耗材
        1.2.3 实验试剂
        1.2.4 溶液配制
    1.3 实验方法
        1.3.1 小鼠 70%肝脏缺血再灌注损伤模型建立及样本采集
        1.3.2 总RNA抽提
        1.3.3 cDNA合成
        1.3.4 实时荧光定量PCR
        1.3.5 免疫印迹检测(Western blot)
        1.3.6 石蜡包埋
        1.3.7 石蜡组织切片
        1.3.8 免疫组织化学
        1.3.9 肝组织内MDA检测
        1.3.10 肝组织 ALDH2 酶活性检测
        1.3.11 数据统计方法
    1.4 实验结果
        1.4.1 肝脏缺血再灌注损伤不影响 ALDH2 表达和分布
        1.4.2 肝脏缺血再灌注损伤使ALDH2 酶活性降低
        1.4.3 Alda-1 预处理能够明显增加 ALDH2 酶活性
        1.4.4 Alda-1 预处理不改变ALDH2 的表达和分布
    1.5 本章小结
第二章 Alda-1 预处理改善肝脏缺血再灌注损伤
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验仪器及耗材
        2.2.3 实验试剂
        2.2.4 溶液配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 小鼠 70 %肝脏缺血再灌注损伤模型建立及样本采集
        2.3.2 小鼠原代肝细胞分离
        2.3.3 小鼠原代肝细胞缺氧再复氧模型
        2.3.4 血清转氨酶(ALT/AST)检测
        2.3.5 石蜡包埋及组织切片
        2.3.6 苏木素-伊红染色(HE 染色)及 Sukuzi 评分
        2.3.7 RNA抽提,逆转录,定量PCR
        2.3.8 免疫印迹检测(Western blot)
        2.3.9 肝脏切片TUNEL法检测细胞凋亡
        2.3.10 免疫组织化学
        2.3.11 小鼠原代肝细胞细胞活性检测
        2.3.12 小鼠原代肝细胞细胞毒性检测
        2.3.13 线粒体膜电位检测
        2.3.14 线粒体ROS检测
        2.3.15 数据统计
    2.4 实验结果
        2.4.1 Alda-1 预处理减轻肝脏缺血再灌注损伤
        2.4.2 Alda-1 预处理减轻肝脏缺血再灌注损伤中的细胞凋亡程度
        2.4.3 Alda-1 预处理减轻肝脏缺血再灌注损伤中的炎性反应
        2.4.4 Alda-1 预处理减轻肝细胞缺氧复氧中的ROS水平并维持线粒体膜电位
    2.5 本章小结
第三章 ALDH2 激活保护肝脏缺血再灌注损伤依赖于AMPK介导的自噬增强
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 实验仪器及耗材
        3.2.3 实验试剂
        3.2.4 溶液配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 小鼠 70 %肝脏缺血再灌注损伤模型建立及样本采集
        3.3.2 血清转氨酶(ALT/AST)检测
        3.3.3 石蜡包埋及组织切片
        3.3.4 苏木素-伊红染色(HE 染色)及 Sukuzi 评分
        3.3.5 透射电镜检测细胞自噬小体
        3.3.6 免疫印迹检测(Western blot)
        3.3.7 小鼠原代肝细胞分离
        3.3.8 小鼠原代肝细胞缺氧再复氧模型
        3.3.9 小鼠原代肝细胞细胞活性检测
        3.3.10 小鼠原代肝细胞细胞毒性检测
        3.3.11 数据统计
    3.4 实验结果
        3.4.1 Alda-1 预处理增强肝脏细胞自噬
        3.4.2 阻断自噬能够逆转Alda-1 的保护作用
        3.4.3 Alda-1 预处理引起的自噬水平提高和 AMPK 激活相关
        3.4.4 阻断 AMPK 能够逆转 Alda-1 的保护作用
    3.5 本章小结
第四章 全文总结与展望
    4.1 全文总结
    4.2 研究展望
参考文献
致谢
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本文编号：3543597