Kartogenin预处理对髌下脂肪垫间充质干细胞外泌体修复关节软骨的作用及机制探索

发布时间：2021-12-19 07:00

　　背景及目的骨关节炎的病理改变通常表现为关节软骨的不规则缺损。由于关节软骨中缺乏血管和神经,一旦损伤后,人体自身对其修复能力极其有限,组织工程再生医学的出现和发展为我们带来了修复病损关节软骨的希望。本研究旨在评价从使用Kartogenin预处理过后的髌下脂肪垫间充质干细胞中提取的外泌体的作用,明确其促进软骨缺损修复的能力及可行性,并探究在该外泌体中发挥主要作用的内容物性质及相关机制。方法及结果第一部分:Kartogenin预处理对髌下脂肪垫间充质干细胞外泌体促进软骨细胞成软骨能力的作用研究研究方法:（1）从兔髌下脂肪垫中提取分离髌下脂肪垫间充质干细胞,并进行传代培养;（2）使用流式细胞仪检测间充质干细胞表面标志物CD34、CD45、CD73、CD90、和CD105等,并对间充质干细胞进行成骨、成脂、成软骨三系诱导分化,鉴定其多向分化潜能;（3）使用Kartogenin预处理间充质干细胞,收集预处理后及未处理的两种间充质干细胞培养过程中的上清液,使用超速离心法收集两种干细胞所分泌的外泌体;（4）使用Western blot检测两种外泌体中特异性表面蛋白表达情况,使用BCA法检测所提取外泌体... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

兔髌下脂肪垫间充质干细胞显微镜下摄片

2、髌下脂肪垫间充质干细胞的鉴定1）IPFP-MSCs 表面抗原的表达鉴定为了确定上述所提取到的髌下脂肪垫间充质干细胞是否符合标准，我们选取 IPFP-MSCsP3 生长良好的细胞，按前文所述方法进行流式细胞仪检测。结果表明阳性抗体 CD73、CD90、CD105 表达均为阳性，且阳性率达到 99%以上，阴性抗体 CD34、CD45 表达为阴性，阳性率在 1%以下(图 1-2)，结果表明我们提取到的确实为髌下脂肪垫间充质干细胞，且纯度符合实验要求。

图 1-3：髌下脂肪垫间充质干细胞三向分化实验。a：成骨诱导分化后茜素红染色，b：成脂诱导分化后油红 O 染色，c：成软骨诱导分化后甲苯胺蓝染色3、软骨细胞的分离培养及鉴定将术中获取的膝关节软骨块按照上述方法培养获得原代软骨细胞，培养 2 周时间，细胞基本铺满培养瓶底部，显微镜下观察可见细胞呈圆形或卵圆形，细胞结构较为丰满，细胞与细胞间有突起相互连接（图 1-4a）。为鉴定其是否为软骨细胞，选择 P2 代生长良好的细胞，使用甲苯胺


本文编号：3543974