髓核相关细胞外基质联合脂肪间充质干细胞修复退变椎间盘的体内外研究

发布时间：2021-12-22 07:45

　　椎间盘退行性疾病在临床上极为常见,是引起颈肩腰腿痛的常见原因。椎间盘内髓核细胞衰老或功能失调导致的髓核退变是椎间盘退变的重要始动因素。干细胞移植可以直接针对病因对退变髓核进行再生修复,而脂肪来源的间充质干细胞（adipose-derived stem cell,ADSC）由于其获取容易,且具备向髓核细胞分化的潜能,常被作为退变髓核生物学修复的种子细胞。然而干细胞在退变椎间盘恶劣的微环境中分化困难,严重制约了髓核退变的干细胞治疗。生物支架充当干细胞的移植载体,同时也能为载荷干细胞生长提供特殊微环境,已成为基于干细胞的组织工程治疗髓核退变的关键要素之一。然而现有的生物支架存在各种缺陷,因此迫切需要更为完善且适用于椎间盘的新型生物支架。髓核相关细胞外基质Ⅱ型胶原（type Ⅱ collagen,CII）和硫酸软骨素（chondroitin sulfate,CS）是正常髓核的重要组分,且自身具有生物活性,对干细胞生存、分化等具有重要调节作用,是构建应用于髓核的生物支架的优良选择。本研究旨在利用髓核相关细胞外基质CII和CS构建预混ADSC的可注射凝胶样细胞递送系统,并在体外验证该系统诱导载荷A... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：140 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

CII和CS对ADSCs细胞增殖，

当京尼平浓度超过０．０２％?（ｗ／ｖ）时，ＡＤＳＣｓ在３，?７，和１４天的ＬＤＨ??释放均显著上升，尤其在第７和１４天（／Ｋ０．０５）。当京尼平浓度小于等于０．０２％??（ｗ／ｖ）时，细胞ＬＤＨ释放无明显升高（图２．３Ａ）。此外，当京尼平浓度大于０．０２％??（ｗ／ｖ）时，ＣＣＳＡ系统中ＡＤＳＣｓ的细胞增殖在第７和１４天明显降低（／？＜０．０５）。??尤其是在第１４天，０．５和１％?（ｗ／ｖ）京尼平构建的ＣＣＳＡ中ＡＤＳＣｓ细胞增殖为０，??可见该京尼平浓度对细胞毒性过大。０．０１和０．０２％?（ｗ／ｖ）的京尼平浓度在第７天??时无显著性差异，但是在第１４天时，０．０２％组的细胞增殖在各组中为最高，明显??２９??

?２第一章实验结果??高于０．０１％组（ｐ＜０．０５）（图２．３Ｂ）。不同浓度京尼平交联后的生物支架微观结构存??在不同，当未经交联时，生物支架呈多孔状，并具有平滑且规则的骨架结构。在??经京尼平交联后，生物支架微观结构变得粗糙与扭曲，孔状结构减少且不规则，??随着京尼平浓度上升，生物支架微观结构的这种变化更加明显。０．０１和０．０２％（ｗ／ｖ）??京尼平浓度交联后的微观结构较为接近，且形态变化相对较小（图２．３Ｃ－Ｈ）。因此??后续实验采用０．０２％?（ｗ／ｖ）京尼平作为最适交联浓度。??Ａ?ｉ２＃＿?Ｂ?丨‘－??＇?ｉｉｉｌｉｉ?ｉａｉｉｌ?ｉｉｉｉｉｌ?匕“…ｌｌＬ?－??§．？！?？．！?（３?Ｉ?？?Ｕｌ?？．ｌ?氤》?Ｉ?？?１．１?Ｍ?Ｉ?？镳？＿！?Ｉ．Ｍ?籲．１?鲁Ｉ?？?？．？！?ｔ．ｌ?Ｍ?Ｉ?？?（．１?ｍ?Ｉ??Ｉｔａｉｃ？４？Ｔ＞?）?１?Ｕ?ＴｈＭ?（？■））?］?Ｔ?Ｍ??Ｗ??图２．３最适京尼平交联浓度的筛选。（Ａ）不同浓度京尼平交联后的ＣＣＳＡ对其中??载荷ＡＤＳＣｓ的毒性作用。（Ｂ）不同浓度京尼平交联后的ＣＣＳＡ对其中载荷ＡＤＳＣｓ??细胞增殖的影响。（Ｃ）?０％，?（Ｄ）?０．０１％，?（Ｅ）?０．０２％，?（Ｆ）?０．１％，?（Ｇ）?０．５％，和??（Ｈ）?１％京尼平交联后的ＣＩＩ／ＣＳ水凝胶在扫描电子显微镜下的微观结构图，比例??尺＝１００叫１。数据以均值±标准差的方式呈现；与对照组相比，＊／？＜０．０５，?＊＊／？＜０．０］；??与０．０２％京尼平组相比


本文编号：3546027