AMPA-GluR2在脊髓损伤后OPCs凋亡中的作用

发布时间：2021-12-22 15:02

　　目的:探讨谷氨酸受体（AMPA-GluR2）在脊髓损伤前后少突胶质前体细胞（OPC）中的表达规律,明确AMPA-GluR2在OPCs凋亡中的作用。方法:1.无特定病原体（SPF级）雌雄不限SD大鼠60只,1-2日龄。经断颈、解剖、剪碎、消化、培养和分离提纯后,获得原代少突胶质前体细胞。采用免疫荧光技术,以抗体A2B5标记少突胶质前体细胞,以DAPI标记细胞核,镜下观察并统计细胞纯度。2.无特定病原体（SPF级）雌性SD大鼠12只,6-8周龄,体重200-250g。采用Allen’s打击法制作SD大鼠脊髓损伤（T9）模型,使用NYU IMPACTOR MODEL-II脊髓打击器造成T9脊髓冲击伤,10g重物,降落高度30mm。手术后12h无菌条件下快速取出脊髓损伤动物模型组损伤处脊髓,对照组仅暴露对应脊髓节段后12h取出脊髓。利用Transwell共培养技术,培养板内培养OPC细胞,Transwell小室内放置脊髓组织块。依次分为对照组、脊髓损伤组、谷氨酸激动组、拮抗剂NBQX组、拮抗剂JSTX组,流式细胞检测技术检测各组凋亡率。3.采用western blot及免疫组化的方法检测AMP... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

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Transwell共培养模式图

1:1000），放于摇床上 30rpm ，4℃过夜。次日回收一抗，TBST 缓冲液浸洗三次， 10min 每次。加入稀释好的稀释好的二抗，室温轻摇一小时。结束后 TBST 缓冲液浸洗三次， 10min 每次。（4）显色、曝光：将 ECL 试剂盒中 A、B 发光液按比例稀释混合。暗室中将 PVDF 膜放在压片板上，再覆以保鲜膜，保鲜膜上放置感光 X 胶片。调整曝光时间，曝光后将胶片依次置于显影液与定影液中，冲洗底片后晾干保存。1.9 统计学方法采用 spss16.0 统计软件进行统计分析。各组数据采用 x±s 表示，进行两样本均数的 t 检验，以 P＜0.05 为差异有统计学意义。2．结果2.1 OPC 纯度鉴定培养的少突胶质前体细胞经过免疫荧光检测纯度，以抗体 A2B5 标记 OPC，以 DAPI 标记细胞核 ，镜下观察，可见少突胶质前体细胞被标记为红色，细胞核被标记为蓝色，以 Image J 处理图片，统计其纯度＞95%，满足实验要求。

天津医科大学硕士学位论文 二、结果率为 6.3%，脊髓损伤组凋亡率为 36.5%，谷氨酸激动组凋亡率为 29.1%，拮抗剂 NBQX 组凋亡率为 11.8%，拮抗剂 JSTx 组凋亡率为 13.7%。脊髓损伤组与谷氨酸激动组 OPC 凋亡率明显高于对照组（正常脊髓组）（P＜0.001），差异有统计学意义。拮抗剂组（NBQX/JSTx）凋亡率低于脊髓损伤组（P＜0.001），差异有统计学意义。拮抗剂（NBQX/JSTx）可在一定程度上提高了细胞的存活率。

【参考文献】：
期刊论文
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[3]大鼠Allen’s脊髓损伤模型的建立及评价[J]. 熊春翔,宗少晖,曾高峰,韦波,赵玉玺.  广西医科大学学报. 2011(02)
[4]少突胶质前体细胞在髓鞘再生中作用的研究进展[J]. 张圆,杨静,阳浩,陈鹏慧.  重庆医学. 2010(17)
[5]少突胶质前体细胞移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响[J]. 吴波,孙磊,任先军.  中华创伤杂志. 2010 (11)



本文编号：3546594