大鼠DRG上TRPV1和NKCC1在疼痛中作用机制的研究
发布时间：2021-12-23 06:04
目的:本研究通过探讨在急性神经源性炎性痛模型中,用辣椒素激活瞬时感受器电位香草酸受体1（transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）后对L4-6背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）神经元细胞中钠钾氯共转运体（sodium-potassium-chloride co-transporter 1,NKCC1）及其发生磷酸化后p-NKCC1的蛋白表达的变化,还有对其功能改变的影响,以及调控两个蛋白之间的内在机制,来阐明两个蛋白在疼痛产生的过程中可能发挥的作用和关系。方法:本研究将180-250 g的雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠作为本研究的主体,将它们随机分为:正常组、辣椒素组和抑制剂组。正常组采用未经任何处理过的大鼠作为对照,辣椒素组采用足底给予辣椒素（3mg/ml）模拟急性神经源性炎性痛模型,抑制剂组采用在造模前鞘内给予抑制剂布美他尼、GF109203X或U0126。首先采用免疫荧光的方法在正常的大鼠DRG上对TRPV1和NKCC1的分布进行观察。然后运用热辐射刺激仪和丙酮实验...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常大鼠DRG神经元NKCC1和TRPV1免疫荧光共表达情况
min、120 min 分别对大鼠进行热痛觉敏感和冷刺激敏感的测定（见图 2）。发现辣椒素组大鼠与正常组大鼠相比 TWL 明显降低，且在 60 min 的时候热痛觉最敏感（正常组 vs. 辣椒素组，22.2115±1.0096 vs. 15.2885±1.3462，p < 0.001，n=6），而 CWL 明显延长（正常组 vs. 辣椒素组，1.1728±0.6790 vs. 20.0617±2.0370，p < 0.001，n=6），且在 60 min 左右可见大鼠抬足、舔足时间明显增加（p < 0.001, n=6），这表明它在 60 min 的时候疼痛达到最明显，对疼痛最敏感。而提前鞘内给予 NKCC1 抑制剂布美他尼（5 μg/μl）后再足底给予辣椒素，发现抑制剂组大鼠的 TWL（辣椒素组 vs. 布美他尼组，15.2885±1.3462 vs. 19.1345±0.9135，p < 0.001，n=6）（图 2A）和 CWL（辣椒素组 vs. 布美他尼组，20.0617±2.0370 vs. 9.1358±1.0494，p < 0.001, n=6）（图 2B）均有所恢复。结果表明足底给予辣椒素后热和冷刺激存在痛觉过敏现象。
大鼠DRG上TRPV1和NKCC1在疼痛中作用机制的研究19图3正常组和辣椒素组大鼠DRG神经元上NKCC1和p-NKCC1的表达情况。Fig.3ImmunofluorescenceexpressionofNKCC1andp-NKCC1onDRGneuronsofthenormalratsandcapsaicingroup.注：（A）免疫荧光显示给予辣椒素后NKCC1和p-NKCC1表达情况（n=6）。白色箭头显示NKCC1在细胞核膜上表达，比例尺=25μm；（B）NKCC1的荧光密度强度和p-NKCC1的荧光密度强度；（C）正常组和辣椒素组NKCC1的核膜在细胞膜上的表达比例。*p<0.05,**p<0.01与正常组比较。Note:(A)ImmunofluorescenceshowingtheexpressionofNKCC1andp-NKCC1aftercapsaicinadministration(n=6).ThewhitearrowshowstheexpressionofNKCC1onthenuclearmembraneofthecell,Scalebar=25μm;(B)IntensityoffluorescencedensityofNKCC1;Intensityoffluorescencedensityofp-NKCC1;(C)ProportionofnuclearmembraneexpressiononthecellmembraneofNKCC1inthenormalgroupandthecapsaicingroup.*p<0.05,**p<0.01comparedwiththecontrolgroup.通过Westernblotting，免疫荧光和PCR技术分别检测给予辣椒素之后NKCC1和p-NKCC1的蛋白表达情况，以及它们的分布情况。免疫荧光的结果显示，辣椒素组中DRG神经元上NKCC1的免疫荧光密度相比正常组表达要高一些（正常组vs.辣椒素组，19.3269±1.41421vs.25.5660±1.45664，p<0.05）（图3A和3B），而且辣椒素组中DRG神经元上NKCC1在中小细胞核膜上的表达也显着增加（正常组vs.辣椒素组，0.0542±0.0203vs.0.5627±0.0068，p<0.001）（图3A和3C）；另外，辣椒素组中p-NKCC1在中小型DRG神经元细胞的细胞膜和细胞质上的免疫荧光密度比正常组表达要高（正常组vs.辣椒素组，30.4275±1.19430vs.36.3270±1.12430，p<0.05）（图3
本文编号：3547932
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常大鼠DRG神经元NKCC1和TRPV1免疫荧光共表达情况
min、120 min 分别对大鼠进行热痛觉敏感和冷刺激敏感的测定（见图 2）。发现辣椒素组大鼠与正常组大鼠相比 TWL 明显降低，且在 60 min 的时候热痛觉最敏感（正常组 vs. 辣椒素组，22.2115±1.0096 vs. 15.2885±1.3462，p < 0.001，n=6），而 CWL 明显延长（正常组 vs. 辣椒素组，1.1728±0.6790 vs. 20.0617±2.0370，p < 0.001，n=6），且在 60 min 左右可见大鼠抬足、舔足时间明显增加（p < 0.001, n=6），这表明它在 60 min 的时候疼痛达到最明显，对疼痛最敏感。而提前鞘内给予 NKCC1 抑制剂布美他尼（5 μg/μl）后再足底给予辣椒素，发现抑制剂组大鼠的 TWL（辣椒素组 vs. 布美他尼组，15.2885±1.3462 vs. 19.1345±0.9135，p < 0.001，n=6）（图 2A）和 CWL（辣椒素组 vs. 布美他尼组，20.0617±2.0370 vs. 9.1358±1.0494，p < 0.001, n=6）（图 2B）均有所恢复。结果表明足底给予辣椒素后热和冷刺激存在痛觉过敏现象。
大鼠DRG上TRPV1和NKCC1在疼痛中作用机制的研究19图3正常组和辣椒素组大鼠DRG神经元上NKCC1和p-NKCC1的表达情况。Fig.3ImmunofluorescenceexpressionofNKCC1andp-NKCC1onDRGneuronsofthenormalratsandcapsaicingroup.注：（A）免疫荧光显示给予辣椒素后NKCC1和p-NKCC1表达情况（n=6）。白色箭头显示NKCC1在细胞核膜上表达，比例尺=25μm；（B）NKCC1的荧光密度强度和p-NKCC1的荧光密度强度；（C）正常组和辣椒素组NKCC1的核膜在细胞膜上的表达比例。*p<0.05,**p<0.01与正常组比较。Note:(A)ImmunofluorescenceshowingtheexpressionofNKCC1andp-NKCC1aftercapsaicinadministration(n=6).ThewhitearrowshowstheexpressionofNKCC1onthenuclearmembraneofthecell,Scalebar=25μm;(B)IntensityoffluorescencedensityofNKCC1;Intensityoffluorescencedensityofp-NKCC1;(C)ProportionofnuclearmembraneexpressiononthecellmembraneofNKCC1inthenormalgroupandthecapsaicingroup.*p<0.05,**p<0.01comparedwiththecontrolgroup.通过Westernblotting，免疫荧光和PCR技术分别检测给予辣椒素之后NKCC1和p-NKCC1的蛋白表达情况，以及它们的分布情况。免疫荧光的结果显示，辣椒素组中DRG神经元上NKCC1的免疫荧光密度相比正常组表达要高一些（正常组vs.辣椒素组，19.3269±1.41421vs.25.5660±1.45664，p<0.05）（图3A和3B），而且辣椒素组中DRG神经元上NKCC1在中小细胞核膜上的表达也显着增加（正常组vs.辣椒素组，0.0542±0.0203vs.0.5627±0.0068，p<0.001）（图3A和3C）；另外，辣椒素组中p-NKCC1在中小型DRG神经元细胞的细胞膜和细胞质上的免疫荧光密度比正常组表达要高（正常组vs.辣椒素组，30.4275±1.19430vs.36.3270±1.12430，p<0.05）（图3
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