低氧通过上调Notch1的表达抑制外周血间充质干细胞成骨分化的研究

发布时间：2021-12-23 06:34

　　研究背景:创伤、肿瘤和先天缺陷都会导致骨缺损,需要骨组织工程搭建支架材料进行缺损修复。种子细胞植入生物相容性支架上修复骨缺损具有十分重要的治疗作用。然而,由于支架内缺乏血管,种子细胞会暂时缺氧和营养缺乏,在骨折形成血肿部位氧气浓度低至0.8%,与空气中20%氧气浓度相比低得多,在骨缺损支架的中心,氧气浓度可能比血肿更低,因为组织液通过复合支架材料渗透较慢。研究表明,在骨缺损的复合支架材料中,只有一小部分种子细胞存活。在低氧甚至缺氧的恶劣条件下,对外周血间充质干细胞的影响尚不完全清楚,通过探讨低氧对外周血间充质干细胞增殖、存活、迁移以及成骨分化的影响,对创造适当的细胞培养或体内移植条件,以保持种子细胞的成骨潜力具有重要的指导意义。研究方法:本研究将从大鼠左心室抽取外周血并提取出外周血间充质干细胞（PBMSCs）,培养于氧浓度分别为1%、9%和21%的低氧小腔室中。细胞增殖使用CCK8试验检测;用活/死细胞染色来检测细胞的存活情况:细胞的迁移能力用平板划痕试验检测;用RT-qPCR、Western blotting检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）、成骨相关转录因子抗体（Oste... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２：?ＰＢＭＳＣｓ在不同氧浓度下的细胞增殖，存活和迁移

和蛋白的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测细胞在１％、９％和２１％氧浓度条件下分别??成骨诱导培养１４天后Ｎｏｔｃｈｌ的蛋白，结果显示三个氧浓度的慢病毒转染组??Ｎｏｔｃｈｌ蛋白明显下降，而慢病毒空载体组显著高于慢病毒转染组（图５Ａ）。然??而，在ｓｉＲＮＡ下调Ｎｏｔｃｈｌ表达后，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测细胞Ｒｕｎｘ２?（成??骨分化的最重要标志物）的蛋白质表达，结果表明Ｒｕｎｘ２蛋白明显增加，与慢??病毒空载体组相比，具有明显的统计学意义，慢病毒转染组的三个氧浓度间无??明显差异（图５Ｂ）。因此，在低氧条件下Ｎｏｔｃｈｌ表达增多可能抑制Ｒｕｎｘ２蛋白??生成。??ａ?０．８－］?■?ＮＣ－ｓｉＲＮＡ??＾?Ｎｏｔｃｈｌ－ｓｉＲＮＡ??Ｃ?林??ＮＣ－ｓｉＲＮＡ?Ｎｏｔｃｈｌ－ｓｉＲＮＡ?｜?｜?〇６－．??１％?９％?２１％?１％?９％?２１％?｜?＊＊??Ｓ?窆?０．４－?■??＿?＿＿?？?？?????？?？?？?

?明显差异的。因此，Ｎｏｔｃｈｌ下调促进了?ＡＬＰ活性和成骨矿化，同时也消除了不??同氧浓度引起的差异，１％低氧浓度抑制成骨分化作用被解除（图６Ｂ）。这些数??据表明Ｎｏｔｃｈｌ下调恢复了?ＴＯＭＳＣｓ的成骨分化能力。??Ａ?ＡＬＰ?ＲＵＮＸ２??ｋ｜｜?ｌ?ｊ?ｋ｜］?１１??、／?＇、／?ｙ、?ａ、／??，ｃ／?／■??麵?ＮＣ－ｓｉＲＮＡ?＿?ＮｏｔｃＭ－ｓｉＲＮＡ?麵?ＮＣ－ｓｉＲＮＡ?隱?ＮｏｔｃＭ－ｓｉＲＮＡ??ＯＳＴＥＲＩＸ?〇ＣＮ??＿?ｔｉｌ??、／?、／?、／?、／?、／?，、??＾?／■??臟?ＮＣ－ｓｉＲＮＡ?画?Ｎ〇ｔｃｈ１－ｓｉＲＮＡ?麵?ＮＣ．ｓｉＲＮＡ?画?Ｍｏｔｃｈｌ－ｓｉＲＮＡ??３８??


本文编号：3547979