小鼠关节软骨来源祖细胞体外软骨组织构建及体内抗血管化研究

发布时间：2022-01-01 05:24

　　第一部分小鼠关节软骨来源祖细胞的提取与鉴定目的:从小鼠关节软骨中分离培养关节软骨来源祖细胞（Articular Cartilage-derived Progenitor Cells,ACPCs）,观察 ACPCs 的细胞形态,鉴定其增殖、分化能力及表面标志物,探究小鼠ACPCs的细胞特性,为软骨组织工程提供合适的种子细胞。方法:无菌条件从5天龄,雄性C57BL/6小鼠各关节中获得软骨组织,以Ⅳ型胶原酶消化6-8h,获得细胞悬液。采用纤连蛋白分黏附分选法获得小鼠ACPCs。流式细胞术鉴定其表面标志物表达。待细胞长至80%行倒置显微镜观察其细胞形态;克隆形成实验评估其增殖能力;三系诱导检测细胞多系分化能力。结果:倒置显微镜观察显示小鼠ACPCs呈中间宽两边细长的短梭形,其形态与间充质细胞类似。流式细胞鉴定,CD29、CD73表达分别为（89.2±1.53）%和（81.1±0.84）%;CD90、CD105 分别为（24.3±1.11）%和（41.6±0.62）%;Notch-1表达为（12.0±1.05）%;CD31、CD44、CD45表达分别为低表达或不表达。克隆形成实验显示小鼠ACPC... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．?ＡＣＰＣｓ细胞形态

图３．?ＡＣＰＣｓ克隆形成实验

?於??０Ｃ：＾５Ｓ＊?ｖ?ｆ?．?ｌ?？?｜?Ｔ？??Ｖ?１／?／．Ｊ?■：？■－？＇＜?９Ｊ?１＊?ｖ?ＩｖＶＵ?ｒ？ｒ？?Ｄ免?Ｌ．ｉｊ?ｌ?Ｕ）?５８轉…＊．．．ｌ?？ｌ?ｔ％．?ＩＮＯｌＧＭ－?ｌ??ｎ?■?ａ?ｎ?ｎｒ??ｎ?Ｉ］?｜?ｍ?ｎｉｌ??｜?／?｜?ｆｉ?｜？ｉ?Ｉ?１１??ｌｋＪ?＼?ｌ?＼?ｌ＼＼?ｌ＼＼??ｑ?Ｖ?ｉｓ５?？ｃ３?ｏ?Ｊ９＊?ｉａＪ?ｉ〇Ｊ?９?ｔｏ１?＞ｅ３?ｉｓ＊?ｏ?１３＇?？７?ｉ？５??图２．?ＡＣＰＣｓ流式细胞鉴定。??３．克隆形成实验??在肉眼下观察，可见在培养皿底部均有多个ＡＣＰＣｓ单细胞克隆形成。在倒置显微镜??下观察，可见每个单细胞克隆是由多个形态类似的短梭形细胞构成，克隆中心由于细??胞密度高，呈现铺路石样细胞分布（图３）。??＿ｇｐ＿??■１??图３．?ＡＣＰＣｓ克隆形成实验。??４．三系诱导??成营诱导在肉眼下观察茜素红Ｓ染色，可见诱导组有大面积橙红色染色区，非??诱导组无橙红色染色区。在倒置显微镜下观察茜素红Ｓ染色，诱导组可见橙红色染色??１２??

【参考文献】：
期刊论文
[1]骨髓间充质干细胞的定向分化潜能[J]. 李乔乔,吴振强,张丽君.  中国组织工程研究. 2017(25)
[2]VEGF抑制剂阿西替尼对人胃癌细胞周期及凋亡的影响[J]. 袁春秀,王宁菊,吴婧.  宁夏医学杂志. 2017(06)
[3]力学刺激调控骨髓间充质细胞向软骨的分化[J]. 张晓梅,彭旭,魏诗航,施雪旎,刘艳,何学令.  中国组织工程研究. 2016(45)
[4]VEGF及其抑制剂Axitinib在非小细胞肺癌临床治疗中的应用[J]. 王翠翠,呼彩莲,马伯林.  现代肿瘤医学. 2014(03)
[5]人胚胎关节软骨来源的间充质干细胞[J]. 崔颖,王宏,徐天睿,李学佩,李凌松.  北京大学学报(医学版). 2004(03)



本文编号：3561709