Ihh在腰椎软骨终板异常钙化退变中的作用及机制研究

发布时间：2022-01-04 18:35

　　目的:通过软骨细胞体外研究及基因敲除小鼠的体内研究探索Ihh在腰椎软骨终板退变及异常钙化中的作用及其机制。方法:第一部分Ihh对体外培养软骨细胞异常钙化退变的作用及机制研究1.获取C57小鼠肋软骨细胞,通过番红O固绿染色、HE染色及免疫组化检测Ⅱ型胶原的表达来鉴定软骨细胞。2.通过RT-PCR分别检测ihh高表达组、ihh信号通路抑制组和空白对照组中的COLII、COLX、Runx2、OCN、ALP、AGG、ANKH、ENPP1等因子的mRNA表达差异。3.利用流式细胞仪分别检测抑制ihh和高表达ihh后对软骨细胞凋亡的影响。第二部分Ihh条件性基因敲除小鼠腰椎软骨终板异常钙化退变的分析研究1.利用ihhfUfl/fl;rosa和prxl-cre;ihhfl/-;rosa基因小鼠繁育出ihh-/-基因敲除小鼠并将其作为实验组,将ihhfl/f1基因小鼠作为对照组,观察各组基因小鼠大体形态;X线观察小鼠脊柱椎体高度的变化。2.micro-CT扫描各组基因小鼠的腰1-2椎间盘,观察结构模型指数、骨小梁数目、骨小梁厚度、骨小梁分离度等指标的变化。3.利用RT-PCR分别检测各组基因小鼠腰椎终... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

软骨细胞的鉴定

A B C图 2.2 软骨细胞的鉴定2.2 细胞形态变化空白对照组(图 A)可观察到软骨细胞表现为椭圆形或者圆形，ihh 高表达组（图B）细胞形态变化不明显，ihh 信号通路抑制组（图 C）软骨细胞则生长缓慢，细胞形态出现受损，有部分细胞皱缩，并且核固缩现象明显，出现单个的悬浮细胞。

检测：Annexin V FITC/PI 双染结果显示对照组凋亡率为凋亡率为 8.34±0.22，ihh 信号通路抑制组凋亡率为 14.组凋亡率高于对照组并有统计学意义，ihh 高表达组凋计学意义（P<0.05）空白对照组 ihh 高表达组组 ihh 信号

【参考文献】：
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本文编号：3568857