长链非编码RNADNAJC3-AS1在骨肉瘤中的表达和功能探讨

发布时间：2022-01-20 18:39

　　研究背景:骨肉瘤（ostesarcoma,OS）是儿童和青少年中最常见的原发性实体骨恶性肿瘤。由于缺乏有效的诊断方法,首次确诊时多数已达中晚期,肺转移率高达约20%。在过去的25年中,得益于手术和化疗的联合治疗,骨肉瘤患者的5年无瘤生存率提高到了 60-75%。然而,肿瘤转移和局部复发的患者临床预后仍较差。这迫切需求我们找出更效的骨肉瘤早期诊断、治疗和预后策略。高通量测序分析结果表明,98%的人类基因组可以转录成非编码RNA,其中长链非编码RNA（long non-coding RNA,IncRNA）不能被翻译成蛋白质,但这并不意味着IncRNA是无用的,更多的证据支持lncRNA在转录和转录后水平上调控基因表达,参与胚胎发育、细胞生长、分化、凋亡和肿瘤发生等活动。特别是IncRNA通过表观遗传沉默、mRNA剪接、IncRNA-miRNA相互作用、IncRNA-蛋白相互作用等方式发挥癌基因或肿瘤抑制因子的作用。在本研究中,我们通过qRT-PCR检测9对骨肉瘤及其匹配的癌旁组织,结果显示:DNAJC3-AS1在骨肉瘤组织中异常高表达,我们通过扩大样本量加以验证,并通过增高或降低DNAJC... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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３．１?Ｚ＞；ＶＡ／ＣＪ?在骨肉瘤标本和细胞系中表达相对增髙??采用ｑＲＴ－ＰＣＲ检测３０对骨肉瘤标本以及其配对的癌旁组织中ＺＷ乂７Ｃ３?＿??的表达量。如图３．１Ａ所示，与配对的癌旁组织相比，ＩＷＡ／Ｃ３?在骨肉??瘤组织中表达量增加〇Ｐ＜０．０ｉ）。另外，与细胞系相比，－ＡＳ７??在骨肉瘤细胞系（ＳＡＯＳ－２和ＨＯＳ）中的表达量也升高（图３．１Ｂ）。此外，我们??还评估了?沿表达量的亚细胞位置，分析显示：ＩＷＡ／ＣＵ幻主要定位??于细胞核中（图３．１Ｃ），该结果提示ＤｉＶＡ／ｄＡＳｉ在骨肉瘤组织中异常高表达，并??且集中分布在细胞核中，可能是骨肉瘤发生、发展的转录调控因子。??Ａ｜?〇．〇３ｉ?＊＊?Ｂ．含?Ｃ?１〇〇］｜—｜?门?｜￣｜｜—｜「ｊ「｜?■?ｎｕｃ｜ｅａｒ??Ｅ?乏?４－?２?０．００８ｉ?女?３?８〇?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??＿ｌＥｊｐ圓??。＾?ＨＯＳ?ＳＡＯＳ－２??图３．１在骨肉瘤标本和细胞系中ＩＷＡ／ＣＪ－ｄＳｉ的表达水平升髙。Ａ．将￡Ｗ儿Ｏ－乂Ｓ７在骨肉??瘤标本（ｎ＝３０）中的表达与配对的癌旁组织标本（ｎ＝３０）中的表达水平进行比较。Ｂ．将??ＺＷＸＯ－ＡＳ７在ＨＯＳ和ＳＡＯＳ－２中的表达水平与ｈＦＯＢ１．１９中的表达水平进行比较。Ｃ？利用??ｑＲＴ－ＰＣＲ技术在ＨＯＳ和ＳＡＯＳ－２细胞中对ＺＷＡ／Ｃ３－ＡＳ７进行亚细胞定位。所有数据用平均??数＋标准差表示。在三个独立的实验中，结果是可重复的。＊尸＜０．０５，?＊＊尸＜〇．０／，?＊＊＊ｐ＜??０．００１?〇??Ｆｉｇ３．１?Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ?ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ?ｅｘｈｉｂ

??导致骨肉瘤细胞系中ＤＮＡＪＣ３?ｍＲＮＡ表达水平的升高或降低（图３．３Ｂ和图Ｓ１Ｂ）。??８０，?２．０，?＊＊??〇）＜?６０?＊＊＊?Ｓｇ１－５－门?＊＊??ｐｄｌＬｌｉａｎ＾?：：ｉｙｙｎｎ??图３．３利用慢病毒转染技术构建过表达或下调￡＞／Ｖ／丨的ＨＯＳ细胞系。（Ａ）ｑＲＴ－ＰＣＲ??检测转染稳定的ＨＯＳ细胞屮Ｄ／ＶＡ／ＣＭＳ／表达ｍ的相对改变倍数。（Ｂ）通过ｑＲＴ－ＰＣＲ检??测稳定转染的ＨＯＳ细胞屮Ｄ／ＶＡ／Ｃ＿５的表达丨卩．：的殳化。我们将上调ＬｎｃＲＮＡ?ＤＡ＾ＪＣＵＳ／表??达的细胞系定义为ｕｐ－Ｌｎｃ，下调ＬｎｃＲＮＡ?ＤＭ４ＪＣＵ５７表达的细胞系定义为ｓｈ－ＲＮＡＩ或??Ｓｈ－ＲＮＡ２，将其各自的对照组定义为ｕｐ－ｃｔｄ和ｓｈ－ｃｔｒｌ。所有数据用平均数＋标准差表示。在??三个独立的实验中


本文编号：3599323