抑制TRPV1在创伤性脑损伤后神经保护作用及其机制研究

发布时间：2022-02-24 00:58

　　目的:瞬时受体电位香草酸亚型1（Transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）是Ca²⁺高通透性的非选择性阳离子通道,可以被细胞肿胀、低渗透压、高温（>43℃）、低pH（<6.0）等刺激以及内源性或合成的配体激活。近期研究发现,在缺血性脑中风模型中TRPV1表达升高,抑制TRPV1在缺血性脑中风的病理生理过程中具有保护作用,但其具体机制尚不明确。此外,抑制TRPV1在创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）中是否具有神经保护作用以及其潜在的分子生物学机制尚缺乏研究。因此,我们选用TBI小鼠模型,研究抑制TRPV1是否对TBI后神经功能缺损和血脑屏障（blood–brain barrier,BBB）破坏具有保护作用,并对其潜在的分子生物学机制进行探究。方法:本研究采用C57BL/6小鼠,应用控制性皮层损伤（controlled cortex impact,CCI）模型进行TBI建模,腹腔注射TRPV1的特异性抑制剂辣椒平（capsazepine,CPZ;1微摩尔/千克体重,2次/... 

【文章来源】：上海交通大学上海市211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：138 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词索引
第一章 绪论
第二章 TRPV1 在创伤性脑损伤后表达升高
    1.引言
    2.材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 实验细胞
            2.1.3 实验仪器
            2.1.4 实验耗材
            2.1.5 实验试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 主要试剂配制
            2.2.2 免疫荧光染色分析
            2.2.3 小鼠控制性皮层损伤(CCI)模型的建立
            2.2.4 小鼠CCI模型病理检查鉴定
            2.2.5 总RNA提取和RT-qPCR
            2.2.6 Western Blot检测
            2.2.7 神经元的原代分离和培养
            2.2.8 星形胶质细胞的原代分离和培养
            2.2.9 细胞牵张损伤模型(SI)的建立
            2.2.10 统计分析
    3.结果
        3.1 TRPV1 在脑组的内皮细胞、神经元和星形胶质细胞中均有表达
        3.2 TRPV1在TBI后小鼠脑组织中m RNA水平上表达升高
        3.3 TRPV1 在 TBI 后小鼠脑组织中蛋白水平上表达升高
        3.4 神经元牵张损伤(SI)建模后的形态学变化
        3.5 神经元细胞牵张损伤(SI)后 TRPV1 表达升高
        3.6 bEnd.3 细胞在牵张损伤(SI)后TRPV1 表达升高
        3.7 星形胶质细胞牵张损伤(SI)后TRPV1 表达升高
    4.讨论
    5.结论
第三章 抑制TRPV1减少创伤性脑损伤后的神经元凋亡并提高小鼠的学习记忆能力
    1.引言
    2.材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 实验细胞
            2.1.3 实验仪器
            2.1.4 实验耗材
            2.1.5 实验试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 主要试剂配制
            2.2.2 实验设计
            2.2.3 小鼠控制性皮层损伤(CCI)模型的建立
            2.2.4 mNSS神经功能缺损评分
            2.2.5 小鼠转棒实验
            2.2.6 小鼠Morris水迷宫实验
            2.2.7 TUNEL和 NeuN原位双标检测神经元凋亡
            2.2.8 免疫荧光染色检测TRPV1在SH-SY5Y细胞中的表达
            2.2.9 SH-SY5Y细胞牵张损伤(SI)模型的建立
            2.2.10 LDH释放检测
            2.2.11 流式细胞术检测牵张损伤后SH-SY5Y细胞凋亡
            2.2.12 Fluo-4 AM检测牵张损伤(SI)后SH-SY5Y细胞内钙离子浓度变化
            2.2.13 Western Blot检测CPZ处理对SH-SY5Y细胞牵张损伤后凋亡相关蛋白表达的影响
            2.2.14 Western Blot检测CPZ处理对SH-SY5Y细胞牵张损伤后MAPK通路的影响
            2.2.15 统计分析
    3.结果
        3.1 抑制TRPV1 改善小鼠TBI后神经功能缺损
        3.2 抑制TRPV1 提高小鼠TBI后转棒实验结果
        3.3 抑制TRPV1 提高TBI后小鼠的空间学习记忆能力
        3.4 CPZ抑制TRPV1 减少TBI后小鼠脑组织神经元的凋亡
        3.5 TRPV1 在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中表达
        3.6 确定CPZ作用于SH-SY5Y细胞的最适浓度
        3.7 CPZ处理后减少牵张损伤引起的SH-SY5Y细胞凋亡
        3.8 CPZ抑制TRPV1 减少牵张损伤引起的SH-SY5Y细胞内钙离子浓度增加
        3.9 抑制TRPV1 减少SH-SY5Y细胞牵张损伤(SI)引起的促凋亡蛋白的表达
        3.10 抑制TRPV1 调节机械牵张损伤(SI)引起的MAPK通路中磷酸化JNK和p38的表达
    4.讨论
    5.结论
第四章 抑制TRPV1 减轻创伤性脑损伤后血脑屏障的破坏
    1.引言
    2.材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 实验细胞
            2.1.3 实验仪器
            2.1.4 实验耗材
            2.1.5 实验试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 主要试剂配制
            2.2.2 实验设计
            2.2.3 小鼠控制性皮层损伤(CCI)模型的建立
            2.2.4 小鼠头部磁共振扫描及水肿体积计算
            2.2.5 小鼠脑组织含水量的检测
            2.2.6 小鼠脑组织伊文思蓝(Evans Blue)渗出量测定
            2.2.7 小鼠脑组织血红蛋白含量测定
            2.2.8 免疫荧光染色分析
            2.2.9 Western Blot检测
            2.2.10 bEnd.3细胞培养与传代
            2.2.11 bEnd.3细胞牵张损伤(SI)模型的建立
            2.2.12 bEnd.3细胞牵张损伤(SI)后LDH释放检测
            2.2.13 TUNEL染色原位检测脑组织细胞凋亡
            2.2.14 流式细胞术检测牵张损伤后bEnd.3 细胞的凋亡
            2.2.15 RNA干扰实验
            2.2.16 统计分析
    3.结果
        3.1 抑制TRPV1 减轻小鼠TBI后脑组的水肿
        3.2 抑制TRPV1 减少小鼠TBI后脑组出血量
        3.3 CPZ抑制TRPV1 减轻小鼠TBI后血脑屏障(BBB)的破坏
        3.4 抑制TRPV1 减少小鼠TBI后紧密连接蛋白的丢失
        3.5 抑制TRPV1 减少小鼠TBI后脑组织细胞的凋亡
        3.6 确定CPZ作用于b End.3 细胞的最适浓度
        3.7 抑制TRPV1 减少牵张损伤导致的bEnd.3 细胞ZO-1 的丢失
        3.8 抑制TRPV1 减少牵张损伤引起的bEnd.3 细胞凋亡
        3.9 siRNA干扰TRPV1后CPZ对 bEnd.3 细胞牵张损伤后的保护作用消失
        3.10 抑制TRPV1 减少bEnd.3 细胞牵张损伤(SI)引起的促凋亡蛋白的表达
        3.11 抑制TRPV1 降低牵张损伤(SI)后bEnd.3 细胞MAPK通路中JNK和 p38磷酸化水平
    4.讨论
    5.结论
全文总结
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]MAPK signal pathways in the regulation of cell proliferation in mammalian cells[J]. WEI ZHANG, Hui Tu LIU The Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of Ministry of Education, College of Life Sciences, Beijing Normal University, Beijing 100875, China.  Cell Research. 2002(01)



本文编号：3641644