唑来膦酸通过AKT/GSK-3β/β-Catenin信号通路对骨肉瘤细胞系凋亡的作用

发布时间：2022-05-08 19:54

　　目的:骨肉瘤来源于间叶组织,多发生在骨组织,是一种常见于青少年或儿童的恶性骨肿瘤,男性患者多于女性,它的病程进展快、肺部转移早、预后不良、易复发,甚至死亡。目前骨肉瘤的治疗包括通过手术措施尽量完整切除病灶以及围手术期的抗肿瘤的综合辅助治疗。新辅助化疗作为化疗的首选,其不仅可以增加手术的安全性,而且能够为患者量身定制合适的假体做好准备。但目前化疗的药物品种有限,常伴随明显的全身毒副反应,给患者带来痛苦,寻找更多有效、副作用小的药物以及阐明其作用原理势在必行。唑来膦酸是具有代表性的、副作用小的第三代二膦酸盐,它具有骨代谢调节的特性,在体外能够起到抑制破骨细胞活动的作用,进而导致破骨细胞调亡,所以能够抑制骨破坏活性增加诱发的骨质吸收。另外有研究显示,唑来膦酸还可以抑制或粘滞肿瘤细胞基质释放的多种刺激因子引起的破骨细胞活动增强和骨钙释放,从而减缓骨转移的进展和发生,并可一定程度上的导致骨肉瘤细胞的死亡。PI3K/AKT信号通路是参与多数细胞的分化调节、生长、繁殖的信号转导通路。AKT别称蛋白激酶B在活化后,继续激活它的下游因子（GSK-3β等）,起到调节细胞周期、凋亡的作用。糖原合成激酶3β是... 

【文章页数】：93 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 试剂
    2.2 耗材
    2.3 仪器
    2.4 实验细胞
    2.5 实验方法
        2.5.1 细胞培养
            2.5.1.1 细胞复苏
            2.5.1.2 细胞传代
            2.5.1.3 细胞冻存
                2.5.1.3.1 配制冻存液
                2.5.1.3.2 消化收取细胞
                2.5.1.3.3 进行冻存
        2.5.2 采用MTT法检测骨肉瘤MG-63 细胞活力变化
            2.5.2.1 MTT法
            2.5.2.2 MTT配制方法
            2.5.2.3 磷酸缓冲液(PBS)配制
            2.5.2.4 贴壁细胞MTT法
            2.5.2.5 MTT注意事项
        2.5.3 划痕实验观察骨肉瘤MG-63 细胞的迁移能力、凋亡改变
        2.5.4 透射电镜观察骨肉瘤MG-63 细胞在100μM唑来膦酸作用48h后细胞凋亡改变
            2.5.4.1 透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)的原理
            2.5.4.2 取材
            2.5.4.3 固定
            2.5.4.4 脱水
            2.5.4.5 浸透
            2.5.4.6 包埋和聚合
            2.5.4.7 超薄切片
            2.5.4.8 染色
        2.5.5 流式细胞仪检测骨肉瘤MG-63、U-2OS细胞在100μM唑来膦酸作用48 h后,细胞的凋亡变化
            2.5.5.1 流式细胞技术(flow cytometry,FCM)
            2.5.5.2 流式实施步骤
            2.5.5.3 流式注意事项
        2.5.6 蛋白印迹方法Western Blot(WB)检测骨肉瘤MG-63、U-2 OS细胞在唑来膦酸作用后,对AKT/GSK-3β/β-Catenin信号通路的影响
            2.5.6.1 蛋白印迹方法原理
            2.5.6.2 WB实验分组
            2.5.6.3 收集细胞蛋白
            2.5.6.4 测定蛋白浓度
            2.5.6.5 电泳
            2.5.6.6 转膜
            2.5.6.7 抗体杂交
        2.5.7 统计分析
3 结果
    3.1 唑来膦酸(ZOL)抑制骨肉瘤MG-63 细胞增殖和细胞迁移
    3.2 唑来膦酸通过抑制AKT/GSK-3β通路作用骨肉瘤MG-63、U-2 OS细胞
    3.3 观察在抑制GSK-3β后,唑来膦酸对骨肉瘤MG-63、U-2 OS细胞增殖和凋亡的影响
        3.3.1 GSK-3β可以介导唑来膦酸对骨肉瘤MG-63 细胞的增殖
        3.3.2 GSK-3β可以介导唑来膦酸对骨肉瘤MG-63、U-2 OS细胞的凋亡
    3.4 观察在抑制GSK-3β后,唑来膦酸对Wnt/β-Catenin通路的影响
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的科研成果
致谢
个人简介



本文编号：3652275