瑞芬太尼后处理促进自噬流减轻心肌缺血再灌注损伤的作用机制研究

发布时间：2022-07-29 21:38

　　背景:缺血性心脏病可导致不可逆转的心肌损伤,并最终导致心力衰竭,是世界范围内死亡的主要原因。及时的恢复血流灌注可挽救缺血心肌,但再灌注本身也可加重缺血造成的损伤,这一概念被称为心肌缺血再灌注（I/R）损伤。瑞芬太尼是一种超短效的μ阿片受体激动药,具有镇痛效果确切、起效迅速、作用时间短、无蓄积且较少受年龄影响等优点,因而广泛用于临床麻醉,尤其是心血管麻醉。大量基础和临床研究表明瑞芬太尼后处理（RPC）可模拟缺血后处理,减轻心肌I/R损伤,发挥强大的心肌保护作用。近年来,越来越多的研究表明自噬广泛参与心肌I/R损伤的发生发展,且自噬在缺血阶段和再灌注阶段起着不同的作用;大多数学者认为缺血期间适度的自噬可保护心肌,而再灌注期间过度的自噬和受损的自噬流则对心肌不利。因而恢复再灌注期间受损的自噬流成为减轻心肌I/R损伤的一个潜在治疗靶点。既往研究已证实缺血后处理在再灌注早期可激活自噬并促进受损的自噬流,发挥抗I/R损伤的心肌保护作用。由于RPC可模拟缺血后处理减轻心肌I/R损伤,因此我们推测自噬可能也参与了RPC的抗I/R损伤的心肌保护作用。本研究拟探讨RPC是否可促进再灌注期间受损的自噬流,从... 

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【学位级别】：博士

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1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验动物及细胞株
    2.2 实验仪器
    2.3 实验药品与试剂
    2.4 实验方法与内容
        2.4.1 大鼠在体实验
            2.4.1.1 在体制备大鼠心肌I/R损伤模型
            2.4.1.2 实验分组与给药
            2.4.1.3 大鼠血清肌钙蛋白 I(Cardiac troponin I, cTnI)浓度的测定
            2.4.1.4 大鼠心肌梗死体积的测定
            2.4.1.5 大鼠心肌组织免疫荧光检测
            2.4.1.6 大鼠心肌组织Western blot检测
        2.4.2 H9c2心肌细胞实验
            2.4.2.1 培养H9c2心肌细胞
            2.4.2.2 心肌细胞H/R损伤模型的建立及RPC处理
            2.4.2.3 实验分组
            2.4.2.4 心肌细胞转染
            2.4.2.5 CCK-8 法检测心肌细胞活力
            2.4.2.6 细胞免疫荧光检测
            2.4.2.7 心肌细胞 Western blot 检测
            2.4.2.8 H9c2 心肌细胞 HO/PI 染色
    2.5 统计分析
3 结果
    3.1 RPC对大鼠心肌I/R损伤引起自噬的影响
        3.1.1 RPC对再灌注早期LC3点聚集的影响
        3.1.2 RPC对再灌注早期LC3Ⅱ和p62 蛋白表达的影响
        3.1.3 RPC 对再灌注早期自噬体和溶酶体融合的影响
        3.1.4 RPC对心肌I/R损伤自噬流的影响
        3.1.5 CQ 对 RPC 抗心肌 I/R 损伤的保护作用的影响
        3.1.6 CQ对RPC抗心肌凋亡作用的影响
    3.2 RPC对 H9c2 心肌细胞H/R损伤引起自噬的影响
        3.2.1 RPC对复氧早期自噬体形成的影响
        3.2.2 RPC 对复氧早期自噬体和溶酶体融合的影响
        3.2.3 RPC对复氧不同时间自噬流的影响
        3.2.4 RPC对复氧不同时间细胞活力的影响
        3.2.5 Baf对 RPC促进H/R损伤自噬流的影响
        3.2.6 CQ对 RPC促进H/R损伤自噬流的影响
        3.2.7 Baf对 RPC抗 H/R损伤的保护作用的影响
        3.2.8 CQ对 RPC抗 H/R损伤的保护作用的影响
        3.2.9 心肌细胞ATG7基因敲低效应的验证
        3.2.10 ATG7 基因敲低对 RPC 心肌保护作用的影响
4 讨论
    4.1 大鼠心肌I/R损伤和H9c2 心肌细胞H/R损伤模型的建立
        4.1.1 大鼠心肌I/R损伤模型的建立
        4.1.2 H9c2心肌细胞H/R损伤模型的建立
    4.2 瑞芬太尼剂量的选择
        4.2.1 瑞芬太尼用于大鼠心肌I/R损伤的剂量选择
        4.2.2 瑞芬太尼用于心肌细胞H/R损伤的剂量选择
    4.3 慢病毒载体介导H9c2心肌细胞ATG7基因敲低
    4.4 自噬参与RPC介导的心肌保护作用
    4.5 RPC增强自噬流保护心肌的机制研究
        4.5.1 LC3和p62在心肌I/R损伤中的作用
        4.5.2 Beclin1 在心肌I/R损伤中的作用
        4.5.3 LAMP2 在心肌I/R损伤中的作用
    4.6 下一步研究计划
5 结论
6 参考文献
附录
    个人简历
        1.基本信息
        2.受教育经历
        3.工作经历
        4.博士期间发表的科研论文
致谢
综述 自噬在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]Autophagy: a double-edged sword for neuronal survival after cerebral ischemia[J]. Wenqi Chen,Yinyi Sun,Kangyong Liu,Xiaojiang Sun.  Neural Regeneration Research. 2014(12)



本文编号：3667228