LINC01116在骨肉瘤组织中的表达及其肿瘤生物学功能与机制的研究

发布时间：2022-12-24 01:13

　　目的:通过生物信息学方法分析骨肉瘤组织与临近正常组织中长链非编码RNA LINC01116、miR-520a-3p与IL6R的表达水平,推测三者在IncRNA-miRNA-mRNA调节轴中的相关性与相关的信号通路。在此基础上,我们进一步检测LINC01116、miR-520a-3p及IL6R在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系中的表达水平,并分析其在骨肉瘤细胞生物学行为中的作用,阐明LINC01116对miR-520a-3p及IL6R调节的分子机制,揭示其在骨肉瘤疾病发生发展中的作用。方法:从公共数据库GEO中下载骨肉瘤芯片GSE16089,采用生物信息学分析其中差异表达的mRNA与IncRNA,并通过基因富集分析发现与LINC01116相关表达失调的信号通路。采用Pearson相关性分析探寻差异表达的mRNA和IncRNA组成的相关网络,探讨LINC01116及IL6R差异表达情况及相关性,并利用韦恩图获取能够同时靶向差异表达的LINC01116及IL6R的miRNAs。通过Kaplan-Meier生存分析,选取与患者生存期密切相关的miR-520a-3p,并经Targetscan与miRan... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：博士

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前言
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第1章 综述 长链非编码RNA与骨肉瘤
    1.1 长链非编码RNA概述
    1.2 骨肉瘤
    1.3 LncRNA和骨肉瘤的关系
        1.3.1 骨肉瘤中LncRNA的表达异常
        1.3.2 LncRNA与骨肉瘤的增殖
        1.3.3 LncRNA与骨肉瘤的侵袭与转移
        1.3.4 LncRNA与骨肉瘤的凋亡
    1.4 总结
第2章 材料和方法
    2.1 生物信息学分析骨肉瘤中表达失调的LncRNA、mRNA和通路
        2.1.1 芯片信息获取与分析
        2.1.2 靶点预测
        2.1.3 差异表达基因KEGG通路富集分析
        2.1.4 相关性分析
        2.1.5 生存分析
        2.1.6 生物信息学分析结果汇总
    2.2 患者资料和标本收集
    2.3 实验主要仪器
    2.4 细胞培养与转染
        2.4.1 细胞培养与传代
        2.4.2 细胞冻存
        2.4.3 细胞复苏
        2.4.4 细胞转染
    2.5 定量逆转录聚合酶链反应(qRT- PCR，Quantitative reverse-transcri-ptionpolymerase chain reaction)步骤
        2.5.1 总RNA提取
        2.5.2 逆转录反应步骤
        2.5.3 Real-time PCR
        2.5.4 qRT-PCR实验结果分析
    2.6 Western blot实验步骤
        2.6.1 制备电泳凝胶
        2.6.2 细胞总蛋白的提取
        2.6.3 蛋白凝胶电泳
    2.7 双荧光素酶报告系统检测
    2.8 MTT法检测骨肉瘤细胞活性
    2.9 Transwell细胞体外侵袭实验
    2.10 细胞凋亡实验
    2.11 小鼠移植瘤模型构建
        2.11.1 实验动物购置
        2.11.2 小鼠移植瘤模型构建步骤
    2.12 数据处理和统计学检验
第3章 结果
    3.1 在骨肉瘤中LNC01116与IL6R表达明显上调,miR-520a-3p表达下调
    3.2 LINC01116促进骨肉瘤细胞增殖与迁移,抑制凋亡
    3.3 LINC01116、miR-520a-3p与IL6R之间的靶向关系
    3.4 MiR-520a-3p抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移并能回复LINC01116与IL6R的作用
    3.5 MiR-520a-3p抑制JAK-STAT信号通路相关蛋白磷酸化水平
    3.6 LINC01116促进小鼠体内的骨肉瘤增长
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3725754