巨噬细胞糖皮质激素受体信号在小鼠皮肤伤口修复中的调控作用

发布时间：2017-05-17 14:02

  本文关键词：巨噬细胞糖皮质激素受体信号在小鼠皮肤伤口修复中的调控作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景创伤修复(wound healing)是生物医学研究领域中一个非常热点的问题。人们在炎症细胞、组织细胞、细胞因子、生长因子以及细胞外基质等方面都对创伤修复做了大量的研究,使我们对机体的这种复杂的生物学过程有了更进一步的认识。巨噬细胞(macrophage)在创伤修复中的作用,尤其得到大家的关注,并对其做了深入的研究,认为巨噬细胞在创伤修复的各个阶段(炎症反应期、细胞增殖与肉芽形成期和组织重塑期)都发挥着十分重要的作用。没有巨噬细胞就不能完成创伤修复,或者巨噬细胞的功能发生障碍也会明显影响整个创伤修复的进程。糖皮质激素(glucocorticoid,GC)作为一种抗炎和免疫抑制药物在临床上得到广泛的应用,然而长时间、大剂量或者不规范的使用也会带来一系列严重的不良反应和并发症,有时甚至影响生命。延迟创伤修复作为GC的一个不良反应在临床上和动物实验中早已被大家观察和认识到,虽然人们也做了初步的探索,但是到目前为止对其中的机制仍没有得到全面和详细的阐明。基于上述研究背景,本文以小鼠皮肤伤口修复为实验模型,以地塞米松(dexamethasone,Dex)作为GC的经典代表,从巨噬细胞的角度探讨GC延迟伤口修复的作用及其机制。第一部分糖皮质激素延迟小鼠皮肤伤口愈合与伤口局部巨噬细胞数目减少有关目的:1.证实GC延迟小鼠皮肤伤口愈合;2.证实GC减少小鼠皮肤伤口局部巨噬细胞数目;3.研究GC对小鼠皮肤伤口局部组织及巨噬细胞的糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)水平的影响。方法:小鼠皮肤伤口修复模型制作完成后,实验组和对照组分别用Dex和PBS处理,在大体水平每天测量伤口直径、隔天拍照伤口愈合情况;伤后第7天取两组小鼠皮肤伤口局部组织进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,在显微镜下观察测量伤口直径并拍照;伤后第7天分别用免疫组织化学法和流式细胞术对两组小鼠皮肤伤口局部组织巨噬细胞的数目进行检测;伤后第7天用Real-time PCR对两组小鼠皮肤伤口局部组织以及局部巨噬细胞的GR的m RNA水平进行检测。结果:1.创伤后第6天和第9天实验组和对照组伤口直径分别为3.2±0.2mm,1.9±0.1mm(***,p0.001)和2.5±0.1mm,1.0±0.2mm(***,p0.001);伤后第7天在组织学水平测量实验组和对照组伤口直径分别为3.2±0.2mm,1.2±0.4mm(**,p0.01);可以看出实验组小鼠皮肤伤口愈合明显延迟。2.用免疫组织化学法对伤后第7天伤口局部巨噬细胞数目进行检测,结果显示每个高倍镜视野下F4/80+(巨噬细胞的表面标志物)细胞数实验组和对照组分别为18.0±1.7,37.3±3.5(**,p0.01);用流式细胞仪分析检测,得到一致的结果,即Dex可以明显减少伤口局部巨噬细胞数目。3.对伤后第7天伤口局部组织以及局部巨噬细胞GR的m RNA水平进行检测,结果发现Dex可以显著提高伤口局部组织和局部巨噬细胞GR的转录水平。结论:GC可以减少伤口局部巨噬细胞数目,从而延迟小鼠皮肤伤口愈合,并且可能是通过GR信号发挥作用的。第二部分糖皮质激素通过抑制巨噬细胞迁移导致伤口局部巨噬细胞数目减少目的:探讨GC导致小鼠皮肤伤口局部巨噬细胞数目减少的初步机制。方法:首先我们用ELISA法检测了实验组和对照组小鼠血清中趋化因子CXCL1,CXCL2的水平,并用流式细胞术对体外培养的两组巨噬细胞表面的趋化因子受体CXCR2的表达情况进行了检测。然后我们分别用经典的体内细胞迁移实验和体外Trans-well实验对Dex和PBS处理的巨噬细胞迁移能力进行了评估,并对迁移后巨噬细胞CXCR2的表达进行了检测,最后从形态学上对体外培养的两组巨噬细胞进行了观察。结果:与对照组相比,实验组小鼠血清中CXCL1,CXCL2的水平明显降低;流式细胞术检测到体外培养的巨噬细胞趋化因子受体CXCR2的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)实验组较对照组也明显减弱;体内细胞迁移实验和体外Trans-well实验对巨噬细胞迁移能力进行评估,结果发现Dex可以明显抑制巨噬细胞的迁移,另外对迁移后的巨噬细胞趋化因子受体CXCR2水平进行检测,结果显示实验组巨噬细胞CXCR2显著降低。体外培养的巨噬细胞形态学观察表明Dex可以抑制巨噬细胞伪足的生长。结论:GC可能是通过下调CXCL1/2-CXCR2来抑制巨噬细胞的迁移,从而导致小鼠皮肤伤口局部巨噬细胞数目减少。第三部分糖皮质激素通过糖皮质激素受体信号减少伤口局部巨噬细胞数目并延迟皮肤伤口愈合目的:初步探讨GC使伤口局部巨噬细胞数目减少,导致小鼠皮肤伤口愈合延迟的信号通路。方法:我们采用了GR的阻断剂——米非司酮(mifepristone,RU486)阻断GC-GR信号通路后,再次进行了小鼠皮肤伤口修复实验。将小鼠分为三组:PBS组,每天腹腔注射PBS;Dex组,每天腹腔注射Dex溶液(5mg/kg);Dex+RU486组,每天注射Dex溶液(5mg/kg)和RU486溶液(2mg/kg)。然后同第一部分,我们分别从大体水平和组织学水平评估小鼠皮肤伤口愈合情况,并用免疫组织化学法和流式细胞术检测伤口局部巨噬细胞的数目,同时检测伤口局部巨噬细胞GR的水平。结果:从大体水平和组织学水平得到的结果均发现:Dex+RU486组小鼠皮肤伤口愈合速度明显较Dex组加快,几乎接近PBS组小鼠皮肤伤口愈合速度。免疫组织化学法和流式细胞术检测伤口局部巨噬细胞数目,结果显示:小鼠皮肤伤口局部巨噬细胞(F4/80+和CD11b+F4/80+细胞)数目Dex+RU486组和PBS组接近,都较Dex组显著增加。此外流式细胞术对伤口局部巨噬细胞GR的水平检测的结果显示:Dex+RU486组小鼠伤口巨噬细胞GR的MFI较Dex组明显减弱,而与PBS组无差异。Dex+RU486组小鼠伤口巨噬细胞GR的MFI较Dex组明显减弱,而与PBS组无差异。结论:GC确实是通过GC-GR信号抑制巨噬细胞迁移到创伤局部从而导致小鼠皮肤伤口延迟愈合。
【关键词】：伤口修复 巨噬细胞 糖皮质激素
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R641
【目录】：

• 英文缩略词表6-8
• 中文摘要8-12
• 英文摘要12-17
• 前言17-20
• 第一部分 糖皮质激素延迟小鼠皮肤伤口愈合与伤口局部巨噬细胞数目减少有关20-32
• 材料和方法20-27
• 实验结果27-30
• 讨论30-32
• 第二部分 糖皮质激素通过抑制巨噬细胞迁移导致伤口局部巨噬细胞数目减少32-41
• 材料和方法32-37
• 实验结果37-39
• 讨论39-41
• 第三部分 糖皮质激素通过糖皮质激素受体信号减少伤口局部巨噬细胞数目并延迟皮肤伤口愈合41-48
• 材料和方法41-43
• 实验结果43-47
• 讨论47-48
• 全文小结48-49
• 参考文献49-54
• 附录54-56
• 致谢56-57
• 综述57-66
• 参考文献63-66

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1 ;豚鼠巨噬细胞经P_(204)处理后的抗石英细胞毒作用[J];国外医学参考资料(卫生学分册);1976年04期

2 邓侠进;;巨噬细胞的抗癌作用[J];遵义医学院学报;1979年02期

3 陆天才;;疾病对肺巨噬细胞的影响[J];煤矿医学;1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一种分离巨噬细胞的简单方法[J];滨州医学院学报;1990年02期

5 谢志坚;巨噬细胞异质性[J];医学综述;2001年06期

6 饶艳;运动及神经内分泌对巨噬细胞功能的调节[J];体育与科学;2002年05期

7 朱金元;;吸烟对肺巨噬细胞的影响[J];浙江医学教育;2003年01期

8 张俊峰;过氧化物酶体增殖物激活受体与单核/巨噬细胞系[J];医学综述;2004年03期

9 韦锦学;顾军;;巨噬细胞的激活诱导死亡[J];生命科学;2006年02期

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1 史玉玲;王又明;丰美福;;巨噬细胞激活作用的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

2 吴国明;周辉;;巨噬细胞和创伤纤维化[A];2009年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明质酸对于淋巴结巨噬细胞运动的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

4 刘革修;欧大明;刘军花;黄红林;廖端芳;;丙丁酚在体外能抑制巨噬细胞脂质氧化介导的低密度脂蛋白氧化并调节氧化巨噬细胞的分泌功能[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

5 叶金善;杨丽霞;郭瑞威;;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

6 秦帅;陈希;孔德明;;构建由绿色荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼系[A];贵州省中西医结合内分泌代谢学术会论文汇编[C];2012年

7 武剑华;徐惠绵;;肿瘤相关巨噬细胞在胃癌中的相关研究[A];第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议论文汇编[C];2014年

8 何军;;血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体升高巨噬细胞内胆固醇水平[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

10 张磊;朱建华;黄元伟;姚航平;;血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞(THP-1重细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年

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1 通讯员 李静 记者 胡德荣;恶性肿瘤巨噬细胞未必皆“恶人”[N];健康报;2014年

2 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年

3 薛佳;免疫系统——人体的“卫士”[N];保健时报;2009年

4 记者 胡德荣;铁泵蛋白“维稳”铁代谢作用首次阐明[N];健康报;2011年

5 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年

6 唐颖 倪兵 陈代杰;巨噬细胞泡沫化抑制剂研究快步进行[N];中国医药报;2006年

7 刘元江;新发现解释肿瘤为何易成“漏网之鱼”[N];医药经济报;2007年

8 本报记者 侯嘉 通讯员 何新乡;今天你补硒了吗[N];医药经济报;2003年

9 左志刚;升血小板药使用注意[N];医药养生保健报;2007年

10 记者 许琦敏;“铁泵”蛋白帮助回收铁元素[N];文汇报;2011年

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本文编号：373589