滑膜间充质干细胞复合壳聚糖水凝胶修复兔半月板缺损的实验研究

发布时间：2017-05-17 20:03

本文关键词：滑膜间充质干细胞复合壳聚糖水凝胶修复兔半月板缺损的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：在临床中,半月板损伤后往往难以自我修复,且无较好的手术修复方式,而传统的半月板切除容易造成膝关节不稳,加快关节软骨退变等严重后果。而使用组织工程的方法来重建缺损的半月板是一种较为可行的研究方向。目的：探究利用CS/beta-Gp温敏水凝胶复合SMSC构建的可注射型组织工程纤维软骨在兔半月板缺损模型中应用的可行性。方法：在动物手术室获取健康新西兰大白兔膝关节滑膜,转运至超净台中,进行仔细消化分离出SMSC;并通过有限稀释法进行纯化后,在体外培养扩增SMSC,在一定条件下进行成骨、成脂、成软骨的多向分化能力鉴定;为使SMSC能在体内长时间的表达向软骨分化的关节细胞因子,利用慢病毒将TGF-β3与BMP-2基因共同转入兔SMSC内,使其长期稳定表达TGF-β3/BMP-2;最后,在体外合成CS/beta-Gp水凝胶后与稳定表达TGF-β3/BMP-2的SMSC进行混合,并注射入兔半月板缺损处,手术后饲养分别6、12周,最后采用过量麻醉法处死,并取出新生成的修复组织,通过大体观察以及病理染色的方法判断修复情况,其中病理染色包括HE染色、甲苯胺蓝染色、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原免疫组化染色等。结果：培养获得的SMSC,形态均一,呈平形状或漩涡形分布,并在一定诱导条件下,可向成骨、成脂、成软骨等不同方向分化。慢病毒转染SMSC后,随着时间延长,绿色荧光逐渐增加,转染96小时后,可见明显绿色荧光,转染率约100%。通过Real-time PCR检测SMSC上游基因表达,Western blot检测蛋白表达,与对照组相比,经转染的SMSC能稳定的表达TGF-β3与BMP-2；在体外将壳聚糖溶液与β-磷酸甘油钠进行预混合后,成功获得了CS/beta-Gp温敏水凝胶,在室温下为液态,在37℃下10分钟即可转变为固态。在体外将CS/beta-Gp温敏水凝胶-与SMSC进行预混合之后注入兔膝关节半月板内,术后笼中饲养,双下肢不制动。在术后6周、12周后取标本进行病理染色,其中,甲苯胺蓝染色可见新生的组织中有蓝色异染为软骨细胞特有的细胞外基质,免疫组化染色可见明显的Ⅰ型胶原与Ⅱ型胶原强阳性表达。结论：结果表明利用慢病毒将TGF-β3与BMP-2基因共同转入SMSC后,使其稳定表达TGF-β3与BMP-2,并利用CS/beta-Gp温敏水凝胶为支架,进行修复兔半月板缺损的方法较为可行并能够在一定程度上修复半月板缺损。
【关键词】：滑膜间充质干细胞 壳聚糖 半月板 组织工程
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R684
【目录】：