缺氧条件下大鼠髓核细胞中HIF-1α与自噬的相关性研究

发布时间：2023-02-25 16:41

　　目的:通过控制氧气含量模拟正常髓核细胞的低氧环境,研究探讨低氧环境能否诱导大鼠髓核细胞发生自噬,并进一步研究低氧状态下髓核细胞中缺氧诱导因子-1α分子的表达量与LC3、Beclin1等自噬标志性分子的表达量是否具有一定的相关性。方法:取体重均一、无椎间盘退化的健康成年SD大鼠,处死后取其尾骨并提取髓核细胞,采用差速贴壁法将提取的髓核细胞纯化后予以传代培养,待髓核细胞传至第三代时,通过显微镜观察其细胞形态,然后将第三代髓核细胞分别予以苏木精-伊红染色法和Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色法进行染色,观察细胞形态及染色结果完成对于髓核细胞的鉴定。通过鉴定确定所提取细胞为大鼠髓核细胞后,取第三代髓核细胞,将其随机分为A、B、C、D 4个组。将A组置于正常氧含量下(37℃、5%CO₂、20%O₂)培养;B组置于低氧状态下(37℃、5%CO₂、1%O₂)培养;C组细胞首先采用HIF-1α-siRNA转染,然后置于与B组同样的低氧条件下培养;D组髓核细胞则是将自噬抑制剂3-MA^[1]加入其内,然后同样...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
前言
研究材料与方法
    1.实验动物及主要试剂、仪器
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2.大鼠髓核细胞分离培养及鉴定
        2.1 大鼠髓核组织的分离
        2.2 大鼠髓核细胞的提取
        2.3 大鼠髓核细胞的传代与培养
        2.4 差速贴壁法纯化大鼠髓核细胞
        2.5 大鼠髓核细胞的冻存与复苏
        2.6 大鼠髓核细胞鉴定
    3.实验分组和方法
        3.1 大鼠髓核细胞的转染
        3.2 大鼠髓核细胞的实验分组
        3.3 大鼠髓核细胞总蛋白与RNA的提取
        3.4 Western blot实验步骤
        3.5 实时荧光定量PCR实验步骤
    4.实验的观测指标
        4.1 Western blot检测HIF-1α与自噬相关分子蛋白表达
        4.2 实时荧光定量PCR检测HIF-1α与自噬相关分子m RNA表达
    5.统计学方法
结果
    1.大鼠髓核细胞形态观察及鉴定
    2.Western blot检测HIF-1α与自噬相关分子蛋白表达
    3.q RT-PCR检测大鼠髓核细胞中HIF-1α与自噬相关基因表达
讨论
结论
参考文献
综述
    1 腰椎间盘退变性疾病的发病机制
    2 髓核细胞低氧环境与缺氧诱导因子
    3 低氧环境与髓核细胞的凋亡
    4 低氧环境与髓核细胞的自噬
    5 总结与展望
    参考文献
作者简介及读研期间主要科研成果
致谢



本文编号：3748812