TUG1调控MTDH影响大鼠脊髓缺血再灌注损伤炎症机制的研究

发布时间：2023-03-04 17:13

　　目的:胸腹主动脉手术常发生脊髓缺血再灌注损伤(Spinal Cord Ischemia Reperfusion Injury,SCIRI),可导致损伤平面以下感觉和运动缺失,常见的并发症是膀胱、肠道和生殖器官功能障碍及截瘫等。尽管外科不断改进手术方法,SCIRI依然未得到完全控制。SCIRI相关的分子机制尚未明确,其中TLR4介导的NF-κB炎症信号通路是其重要机制。蛋白TRIL(TLR4 interactor with leucine-rich repeats,TRIL)和MTDH(metadherin,MTDH)在NF-κB炎症通路中发挥重要作用,近年来,miRNA中miR-29家族和LncRNA TUG1在神经和缺血疾病方面得到关注,本研究拟在现有的炎症通路的基础上,探索SCIRI中TUG1和miR-29b-1-5p对下游炎症蛋白的调控机制。研究方法:通过在主动脉弓处的左颈总动脉和左锁骨下动脉之间夹闭14min后开放,建立大鼠脊髓缺血再灌注模型。随机分为IR组(缺血组)和Sham组(假手术组,不夹闭主动脉弓),通过microarray芯片对IR后异常表达的脊髓miRNA进行分析,...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:大鼠脊髓缺血再灌注损伤后miR-29b-1-5p对脊髓功能及TRIL和MTDH蛋白表达的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和方法
            2.2.1 研究对象
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 动物手术模型建立
            2.2.4 鞘内注射
            2.2.5 行为学检测
            2.2.6 组织学制备
            2.2.7 Real-time PCR检测miR-29b-1-5p的表达水平
            2.2.8 Western Blot印迹检测大鼠脊髓TRIL,MTDH,TLR4,NF-κB和 IL-1β蛋白表达
            2.2.9 伊文思蓝测定BSCB完整性
            2.2.10 双荧光素酶报告基因测定miR-29b-1-5p和 TRIL和 MTDH的结合
        2.3 统计学处理
    3 结果
        3.1 缺血再灌注损伤后各时间点脊髓组织miR-29b-1-5p的表达
        3.2 干预miR-29b-1-5p对缺血再灌注损伤后脊髓功能的影响
            3.2.1 miR-29b-1-5p对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后的下肢功能评分影响
            3.2.2 miR-29b-1-5p对大鼠脊髓BSCB通透性影响
        3.3 缺血再灌注损伤后脊髓组织TRIL和 MTDH的蛋白表达及和下游炎症通路的关系
            3.3.1 缺血再灌注损伤后脊髓组织TRIL和 MTDH的蛋白表达
            3.3.2 沉默TRIL和 MTDH降低缺血再灌注损伤后下游炎症蛋白的表达
        3.4 miR-29b-1-5p与 TRIL和 MTDH的调控关系
            3.4.1 干预miR-29b-1-5p对缺血再灌注损伤后TRIL和 MTDH的蛋白表达影响
            3.4.2 miR-29b-1-5p和TRIL及MTDH的双荧光素酶报告基因检测
    4 讨论
    5 结论
第二部分:大鼠脊髓缺血再灌注损伤后TUG1对脊髓功能及miR-29b-1-5p表达的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和方法
            2.2.1 研究对象
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 动物手术模型建立
            2.2.4 鞘内注射
            2.2.5 行为学检测
            2.2.6 组织学制备
            2.2.7 Real-time PCR检测和TUG1和miR-29b-1-5p的表达水平
            2.2.8 伊文思蓝测定BSCB完整性
            2.2.9 双荧光素酶报告基因测定TUG1和miR-29b-1-5p的结合
        2.3 统计学处理
    3 结果
        3.1 缺血再灌注损伤后各时间点脊髓组织TUG1的表达
        3.2 沉默TUG1对缺血再灌注损伤后脊髓功能的影响
            3.2.1 沉默TUG1对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后的下肢功能评分影响
            3.2.2 沉默TUG1对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后BSCB通透性影响
        3.3 TUG1在脊髓缺血再灌注损伤中对miR-29b-1-5p的调控关系
            3.3.1 沉默TUG1对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后miR-29b-1-5p的表达影响
            3.3.2 TUG1和miR-29b-1-5p的双荧光素酶报告基因检测
    4 讨论
    5 结论
第三部分:TUG1通过miR-29b-1-5p调控MTDH影响大鼠脊髓缺血再灌注损伤后脊髓功能和炎症通路
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和方法
            2.2.1 研究对象
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 动物手术模型建立
            2.2.4 鞘内注射
            2.2.5 行为学检测
            2.2.6 组织学制备
            2.2.7 Western Blot印迹检测大鼠脊髓TRIL,MTDH,TLR4,NF-κB和IL-1β蛋白表达
            2.2.8 伊文思蓝测定BSCB完整性
            2.2.9 免疫荧光染色
        2.3 统计学处理
    3 结果
        3.1 沉默TUG1后抑制miR-29b-1-5p对缺血再灌注损伤后脊髓功能影响
            3.1.1 沉默TUG1后抑制miR-29b-1-5p对缺血再灌注损伤后下肢功能评分的影响
            3.2.2 沉默TUG1后抑制miR-29b-1-5p对大鼠脊髓BSCB通透性影响
        3.2 沉默TUG1后抑制miR-29b-1-5p对缺血再灌注损伤后MTDH和炎症蛋白表达的影响
        3.3 沉默TUG1后过表达TRIL对缺血再灌注损伤后TLR4 和炎症蛋白表达的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述 非编码RNA在中枢神经系统缺血再灌注损伤的研究进展
    参考文献
攻读学位期间取得的科研成果
致谢
个人简历



本文编号：3754669