乳腺癌组织中27-羟胆固醇的来源、病理生理学作用及其调控机制

发布时间：2023-03-04 16:30

　　研究背景及意义:乳腺癌是女性高发肿瘤之一,研究表明乳腺癌的发病与胆固醇代谢异常相关。27-羟胆固醇(27-HC)是胆固醇的代谢产物,是机体中雌激素受体(ER)的内源性调节因子,具有促进ER阳性乳腺癌细胞生长的作用。临床数据显示,乳腺肿瘤样本中27-HC含量显著上升。TCGA数据库肿瘤样本以及多种人乳腺癌细胞系表达谱分析发现,乳腺癌组织27-HC降解酶CYP7B1(氧甾酮7α-羟化酶)的表达显著低于正常乳腺组织。有研究表明,乳腺癌组织27-HC的升高与患者循环血液的27-HC浓度无明显相关性,提示肿瘤组织27-HC的升高可能由肿瘤组织局部胆固醇代谢引起。此外,也有研究显示,乳腺癌组织富含巨噬细胞,并对癌细胞的生长及迁移具有明显的促进作用。因此,深入探讨乳腺癌组织27-HC的来源、病理生理学作用以及调控机制对乳腺癌的防治具有重要意义。研究策略与方法:1.乳腺癌细胞和单核/巨噬细胞CYP27A1表达以及27-HC分泌的检测:1)采用Western blot检测人ER阳性乳腺癌MCF-7细胞、ER阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞以及人单核THP-1细胞的CYP27A1和CYP7B1的表达水平...

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【学位级别】：博士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 前言
第2章 单核/巨噬细胞CYP27A1的表达显著高于乳腺癌细胞
    2.1 实验目的
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 细胞增殖实验
        2.2.3 CCK-8检测细胞活力
        2.2.4 蛋白提取及定量
        2.2.5 Western blot
        2.2.6 细胞免疫荧光
        2.2.7 ELISA检测
    2.3 实验结果
        2.3.1 单核细胞高表达蛋白CYP27A1
        2.3.2 THP-1 与肿瘤细胞共培养后显著增加CYP27A1 的表达
        2.3.3 27-HC对MCF-7细胞增殖的影响
第3章 乳腺癌细胞CYP7B1基因呈现高甲基化状态
    3.1 实验目的
    3.2 材料与方法
    3.3 实验结果
第4章 肿瘤细胞诱导单核细胞向M2型巨噬细胞分化
    4.1 实验目的
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 RNA的提取、逆转录以及Q-PCR
        4.2.3 流式分析
        4.2.4 小鼠腹腔巨噬细胞提取
        4.2.5 小鼠骨髓细胞提取
        4.2.6 骨髓细胞的分化
        4.2.7 细胞HE染色
        4.2.8 电镜观察外泌体形态
    4.3 实验结果
        4.3.1 乳腺细胞上清诱导单核细胞分化
        4.3.2 小鼠乳腺癌细胞4T1上清诱导骨髓细胞分化
        4.3.3 不同类型巨噬细胞分泌27-HC的能力比较
        4.3.4 肿瘤细胞外泌体诱导单核/巨噬细胞分化
第5章 27-HC促进单核细胞的聚集
    5.1 实验目的
    5.2 材料与方法
    5.3 实验结果
        5.3.1 27-HC对巨噬细胞增殖没有影响
        5.3.2 27-HC促进巨噬细胞分泌趋化因子
第6章 乳腺肿瘤组织中27-HC的浓度与浸润的巨噬细胞数量正相关
    6.1 实验目的
    6.2 材料与方法
        6.2.1 4T1小鼠肿瘤模型建立
        6.2.2 小鼠血常规检测
        6.2.3 组织切片HE染色
        6.2.4 组织切片免疫组化
        6.2.5 27-HC浓度测定
    6.3 实验结果
        6.3.1 荷瘤鼠表现出全身炎症特点
        6.3.2 肿瘤27-HC含量与浸润的巨噬细胞数量正相关
第7章 不同来源巨噬细胞对4T1肿瘤转录组基因表达的影响
    7.1 实验目的
    7.2 材料与方法
        7.2.1 BGISEQ-500 RNA-seq测序
        7.2.2 Q-PCR验证
    7.3 实验结果
第8章 全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3754614