TGF-β1预处理调控HIF-1α蛋白表达对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

发布时间：2017-05-19 00:09

  本文关键词：TGF-β1预处理调控HIF-1α蛋白表达对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)预处理调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达水平是否可以影响心肌细胞缺氧/复氧损伤。方法:建立心肌细胞株H9c2缺氧/复氧损伤模型及缺氧预处理模型,将H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(Control组)、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧预处理组(HPC组)、TGF-β1预处理组(TGF-β1-Pre组)、TGF-β1抑制剂组(SB431542组),各组复氧结束后测定培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性、HIF-1α蛋白表达水平及心肌细胞凋亡率。结果:Control组、H/R组、HPC组、TGF-β1-Pre组、SB431542组的LDH活性(U/L)分别为201.2±48.9、936.6±93.7、727.0±75.9、747.3±63.1、957.3±55.3,心肌细胞凋亡率(%)分别为25.5±3.2、71.8±5.5、42.8±6.1、54.1±4.1、82.8±9.7,与H/R组比较,HPC组、TGF-β1-Pre组的LDH活性、心肌细胞凋亡率显著降低(P0.05),HIF-1α蛋白表达水平升高(P0.05);与HPC组比较,TGF-β1-Pre组各项指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论:不论在常氧条件还是在缺氧环境下,TGF-β1均可以增加HIF-1α的蛋白表达水平,并且在缺氧复氧诱导所致的心肌细胞损伤中发挥抗凋亡作用,这种作用与调控HIF-1α的蛋白水平有关。
【关键词】：转化生长因子-β1 缺氧/复氧损伤 缺氧诱导因子-1α 预处理
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 摘要8-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 研究内容与方法13-19
• 1.研究对象13
• 1.1 主要试剂与耗材13
• 1.2 主要仪器13
• 2.方法13-18
• 2.1 实验试剂的配制13-14
• 2.2 H9c2心肌细胞培养方法14-15
• 2.2.1 H9c2心肌细胞复苏14
• 2.2.2 H9c2心肌细胞传代14
• 2.2.3 H9c2心肌细胞冻存14-15
• 2.2.4 H9c2心肌细胞换液15
• 2.3 H9c2心肌细胞H/R模型的建立15
• 2.4 实验干预方法15-16
• 2.4.1 不同浓度的TGF-β1 干预15
• 2.4.2 不同时间的TGF-β1 干预15
• 2.4.3 TGF-β1 在常氧或缺氧条件下干预15-16
• 2.5 实验分组16
• 2.6 使用蛋白电泳（Western blot）检测HIF-1α 的蛋白表达16-18
• 2.6.1 细胞蛋白的提取16
• 2.6.2 细胞蛋白浓度的测定16
• 2.6.3 聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）16-18
• 2.6.3.1 凝胶的配制16-17
• 2.6.3.2 电泳17
• 2.6.3.3 转膜17
• 2.6.3.4 封闭17
• 2.6.3.5 一抗孵育17
• 2.6.3.6 洗膜及二抗孵育17
• 2.6.3.7 洗膜及曝光17-18
• 2.7 乳酸脱氢酶的测定18
• 2.8 细胞凋亡率的检测18
• 2.9 Western blot及Tunel细胞凋亡结果分析18
• 3.统计学分析18-19
• 结果19-24
• 讨论24-30
• 小结30-31
• 致谢31-32
• 参考文献32-38
• 综述38-44
• 参考文献41-44
• 攻读硕士学位期间发表的学位论文44-45
• 导师评阅表45

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