Transwell共培养体系中背根神经节对骨髓间充质干细胞的作用及其机制研究

发布时间：2023-04-01 06:06

　　【背景】严重创伤等引起的大段骨缺损的治疗一直是骨科临床上的难题。组织工程骨的迅速发展为大段骨缺损的治疗提供了一种可行的方案。然而,目前组织工程骨(TEB)并没有广泛应用于临床大段骨缺损的治疗,主要因为植入体内的组织工程骨缺乏血管和神经的支配,致使组织工程骨体内成骨效果不佳。课题组前期在动物实验研究中发现感觉神经束植入组织工程骨可以显著促进组织工程骨成骨。然而目前感觉神经促组织工程骨成骨的体外细胞学机制并不明确。【目的】1.探究感觉神经促进组织工程骨成骨的体外细胞学机制;2.探究共培养体系中背根神经节(DRG)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖分化的影响;3.探究共培养体系中DRG对BMSCs作用的内在机制。【方法】1.通过全骨髓冲洗贴壁培养法提取BMSCs,并从细胞形态、多向分化潜能、特异性CD分子三方面鉴定提取的BMSCs;2.Transwell共培养体系的构建。取新生SD大鼠背根神经节(DRG)与绿色荧光大鼠骨髓间充质干细胞BMSCs构建Transwell共培养体系。实验组为DRG与BMSCs Transwell共培养(可表示为DRG+BMSCs组),DRG神经细胞位于Trans...

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
    1.组织工程骨研究现状和制约因素
    2.周围神经(尤其是感觉神经和交感神经)对骨组织生理病理过程的影响
    3.感觉神经和交感神经在软骨生理和发育中的作用
    4.感觉神经和交感神经在骨关节炎病理中的作用
    5.骨组织中感觉神经和交感神经的支配
    6.骨组织中感觉神经肽和儿茶酚胺及其受体对骨重建及骨代谢的作用
    7.本课题组前期的研究基础
1 材料
    1.1 实验动物
    1.2 实验仪器和器械
    1.3 实验试剂
    1.4 PCR引物
2 方法
    2.1 GFP大鼠BMSCs的分离提取培养
    2.2 SD大鼠籽鼠DRG的提取与处理
    2.3 DRG与 GFP-BMSCs共培养的方法
    2.4 流式细胞检测
    2.5 BMSCs成骨诱导及茜素红染色
    2.6 BMSCs成脂诱导和油红O染色
    2.7 BMSCs成软骨诱导和阿利辛蓝染色
    2.8 CCK8 检测细胞增殖
    2.9 克隆形成实验(CFU)
    2.10 RT-PCR
    2.11 蛋白电泳检测(Western blot)
    2.12 免疫荧光染色及观察
    2.13 透射电镜观察自噬变化
    2.14 药物处理
    2.15 统计学分析
3 结果
    3.1 绿色荧光BMSCs和背根神经节细胞的培养
    3.2 GFP-BMSCs的鉴定
    3.3 DRG与 BMSCs共培养对BMSCs黏附的影响
    3.4 DRG与 BMSCs共培养促进BMSCs的增殖和三向分化潜能的维持
    3.5 DRG与 BMSCs共培养促进BMSCs的克隆形成能力和干性基因的表达
    3.6 DRG与 BMSCs共培养可提高BMSCs的自噬水平
    3.7 共培养过程中BMSCs内 AMPK/mTOR信号通路被激活
    3.8 Compound C可降低共培养体系中BMSCs的自噬水平和干性基因的表达量
    3.9 Compound C单独作用对BMSCs自噬和干性基因表达无影响
    3.10 NK1R特异性抑制剂阿瑞匹坦可降低共培养体系中BMSCs的自噬水平和干性基因表达量
4 讨论
    4.1 共培养体系中DRG促进BMSCs的增殖与三向分化潜能的维持
    4.2 共培养体系中BMSCs除成骨、成脂、成软骨分化潜能增强外,其他方向分化潜能也可能增强
    4.3 共培养体系中DRG通过增强BMSCs自噬水平维持BMSCs干性
    4.4 共培养体系中AMPK/mTOR信号通路介导了BMSCs自噬增强
    4.5 共培养体系中DRG分泌的SP对 BMSCs自噬和干性维持起到重要作用
    4.6 BMSCs旁分泌功能及共培养体系的中DRG与 BMSCs动态相互作用的观点
    4.7 本研究对于组织工程骨构建的意义
小结
参考文献
研究成果
致谢



本文编号：3776586