包埋载SHH壳聚糖微球的纤维蛋白支架促大鼠脊髓损伤修复的实验研究
发布时间：2023-04-01 15:03
目的:利用冷冻干燥法,将包载音猬因子(sonic hedeghog,SHH)的壳聚糖(chitosan,CS)微球填充于纤维蛋白胶(fibrin glue,Fg),构建具有三维结构的复合生物工程支架,并探讨该支架对外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs)增殖与分化的影响;建立大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型,移植EMSCs与复合纤维蛋白支架至脊髓损伤处,评价大鼠脊髓损伤修复的效果。方法:(1)首先离子凝胶法制备包载SHH的壳聚糖微球,而后将其与纤维蛋白胶混合,冷冻干燥成型,即得到包埋载SHH壳聚糖微球的纤维蛋白支架(Fg-CS-SHH),然后采用扫描电子显微镜和ELISA分别观察支架微观结构和SHH缓释效果,并制备包载SHH的纤维蛋白支架(FG-SHH)和包载SHH的壳聚糖支架(CS-SHH)作为对照;(2)取健康SD大鼠鼻粘膜组织,培养原代EMSCs并传代扩增。将第三代EMSCs通过悬浮抗贴壁法培养EMSCs来源的神经球样细胞,用免疫荧光法鉴定其表面标志蛋白。(3)将EMSCs来源的神经球分别种植于上述支架...
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩写词表
绪论
1.研究背景
2.研究目标
第一章 包埋载SHH壳聚糖微球的纤维蛋白支架的构建
1 实验材料
1.1 实验试剂
1.2 实验仪器
2 实验方法
2.1 壳聚糖微球(CS-SHH)、纤维蛋白凝胶支架(FG-SHH)的制备
2.2 复合纤维蛋白支架(FG-CS-SHH)的制备
2.3 复合纤维蛋白支架的缓释动力学测定
2.4 统计学处理
3 结果
3.1 微球及支架的形态
3.2 微球及支架的缓释性能
第二章 外胚层间充质干细胞及其来源的神经球的培养和鉴定
1 实验材料
1.1 实验试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验动物
2 实验方法
2.1 外胚层间充质干细胞的分离、培养及传代
2.2 EMSCs的干细胞特性鉴定
2.3 EMSCs来源的神经球的培养
2.4 EMSCs来源的神经球的表面标志蛋白鉴定
3 结果
3.1 EMSCs的形态学和表面标志鉴定
3.2 EMSCs来源的神经球的形态学和表面标志鉴定
第三章 FG-CS-SHH对EMSCs增殖与分化的影响
1 实验材料
1.1 实验试剂
1.2 实验仪器
1.3 工作液配置
2 实验方法
2.1 FG-CS-SHH对EMSCs来源的神经球的的诱导
2.2 MTT检测FG-CS-SHH对EMSCs增殖的影响
2.3 免疫荧光检测FG-CS-SHH对EMSCs分化的影响
2.4 Western blot检测FG-CS-SHH对EMSCs分化的影响
2.5 统计学处理
3 结果
3.1 支架对EMSCs的体外生物相容性
3.2 支架中神经再生相关蛋白的免疫荧光检测
3.3 支架中神经再生相关蛋白的免疫印迹检测
第四章 大鼠脊髓横断损伤模型的建立
1 实验材料
1.1 实验器材
1.2 实验动物
2 实验方法
3 结果
第五章 移植FG-CS-SHH促大鼠脊髓横断损伤修复的效果评价
1 实验材料
1.1 实验试剂
1.2 试验仪器
1.3 工作液配置
2 实验方法
2.1 下肢运动功能评分
2.2 HE染色和免疫组织化学染色检测脊髓横断损伤修复的效果
2.2.1 脊髓组织样本的制备
2.2.2 冰冻切片及HE染色
2.2.3 免疫组织化学染色
2.3 Western blot法检测脊髓横断损伤修复的效果
2.4 统计学处理
3 结果
3.1 大鼠下肢运动功能评分
3.2 脊髓损伤平面组织形态学分析
3.3 免疫印迹检测脊髓组织中的神经再生相关蛋白
讨论
结论
参考文献
综述 神经营养因子治疗脊髓损伤的研究进展
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表学术论文
本文编号：3777354
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩写词表
绪论
1.研究背景
2.研究目标
第一章 包埋载SHH壳聚糖微球的纤维蛋白支架的构建
1 实验材料
1.1 实验试剂
1.2 实验仪器
2 实验方法
2.1 壳聚糖微球(CS-SHH)、纤维蛋白凝胶支架(FG-SHH)的制备
2.2 复合纤维蛋白支架(FG-CS-SHH)的制备
2.3 复合纤维蛋白支架的缓释动力学测定
2.4 统计学处理
3 结果
3.1 微球及支架的形态
3.2 微球及支架的缓释性能
第二章 外胚层间充质干细胞及其来源的神经球的培养和鉴定
1 实验材料
1.1 实验试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验动物
2 实验方法
2.1 外胚层间充质干细胞的分离、培养及传代
2.2 EMSCs的干细胞特性鉴定
2.3 EMSCs来源的神经球的培养
2.4 EMSCs来源的神经球的表面标志蛋白鉴定
3 结果
3.1 EMSCs的形态学和表面标志鉴定
3.2 EMSCs来源的神经球的形态学和表面标志鉴定
第三章 FG-CS-SHH对EMSCs增殖与分化的影响
1 实验材料
1.1 实验试剂
1.2 实验仪器
1.3 工作液配置
2 实验方法
2.1 FG-CS-SHH对EMSCs来源的神经球的的诱导
2.2 MTT检测FG-CS-SHH对EMSCs增殖的影响
2.3 免疫荧光检测FG-CS-SHH对EMSCs分化的影响
2.4 Western blot检测FG-CS-SHH对EMSCs分化的影响
2.5 统计学处理
3 结果
3.1 支架对EMSCs的体外生物相容性
3.2 支架中神经再生相关蛋白的免疫荧光检测
3.3 支架中神经再生相关蛋白的免疫印迹检测
第四章 大鼠脊髓横断损伤模型的建立
1 实验材料
1.1 实验器材
1.2 实验动物
2 实验方法
3 结果
第五章 移植FG-CS-SHH促大鼠脊髓横断损伤修复的效果评价
1 实验材料
1.1 实验试剂
1.2 试验仪器
1.3 工作液配置
2 实验方法
2.1 下肢运动功能评分
2.2 HE染色和免疫组织化学染色检测脊髓横断损伤修复的效果
2.2.1 脊髓组织样本的制备
2.2.2 冰冻切片及HE染色
2.2.3 免疫组织化学染色
2.3 Western blot法检测脊髓横断损伤修复的效果
2.4 统计学处理
3 结果
3.1 大鼠下肢运动功能评分
3.2 脊髓损伤平面组织形态学分析
3.3 免疫印迹检测脊髓组织中的神经再生相关蛋白
讨论
结论
参考文献
综述 神经营养因子治疗脊髓损伤的研究进展
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表学术论文
本文编号：3777354
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/3777354.html
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