右美托咪定对高浓度利多卡因诱导PC12细胞毒性的影响

发布时间：2023-04-29 22:42

　　目的:已知高浓度利多卡因具有潜在的神经毒性效应,拟构建利多卡因神经细胞毒性模型,观察右美托咪定对高浓度利多卡因神经细胞毒性的表观遗传调控与机制。方法:首先构建体外高浓度利多卡因PC12细胞毒性模型,观察细胞的活力。在右美托咪定与利多卡因联合处理48 h后检测PC12细胞活力并计算增殖抑制率,检测细胞凋亡水平并检测MAPK信号通路蛋白。通过文献查阅和软件预测miR-let-7b及其可能的靶点蛋白COL3A1,验证二者间的关系,检测miR-let-7b对COL3A1-3’UTR的结合情况,在利多卡因和右美托咪定联合处理后对细胞活力,细胞增殖水平,细胞凋亡水平,细胞迁移和侵袭能力,细胞周期,调亡蛋白等进行检测。结果:利多卡因1mM能明显降低PC12细胞活力。右美托咪定处理过的PC12细胞能够明显增加细胞活力,降低增殖抑制率,抑制细胞凋亡水平,减少MAPK信号通路中的蛋白水平;右美托咪定与过表达miR-let-7b、COL3A1沉默表达均增加细胞活力、细胞侵袭和迁移能力,降低增殖抑制率,抑制细胞凋亡水平,改变细胞周期,上调Bcl-2表达,下调Caspase-3表达。结论:右美托咪定可能通过上调...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
第一部分 绪论
    1. 研究背景
        1.1 局麻药与神经毒性
        1.2 体外急性毒性药物安全性评价模型
        1.3 可能的分子作用机制
        1.4 研究思路
        1.5 研究意义
第二部分 右美托咪定对利多卡因诱导产生的PC12细胞毒性的影响
    2.材料与方法
        2.1 药品与试剂
        2.2 使用仪器
        2.3 细胞培养与药物预处理
        2.4 细胞增殖水平检测
        2.5 蛋白提取和western blotting检测
        2.6 细胞凋亡水平检测
        2.7 数据统计分析
    3. 实验结果
        3.1 右美托咪定对PC12细胞的安全用药浓度范围探索
        3.2 右美托咪定对利多卡因预处理后PC12细胞活力的影响
        3.3 右美托咪定对利多卡因预处理后PC12细胞凋亡水平的影响
        3.4 右美托咪定和利多卡因共同作用下对MAPK信号通路相关蛋白的影响
    4. 讨论
第三部分 miR-let-7b在右美托咪定减缓利多卡因诱导PC12细胞毒性效应的作用
    2. 材料与方法
        2.1 药品与试剂
        2.2 使用仪器
        2.3 microRNA预测
        2.4 质粒构建
        2.5 细胞培养与药物处理
        2.6 双荧光素酶报告基因检测
        2.7 RNA抽提和Real-time RT-PCR检测
        2.8 蛋白提取和western blotting检测
        2.9 PC12细胞平板克隆形成实验
        2.10 流式细胞术Edu染色增殖检测
        2.11 Hoechest33258染色检测细胞增殖
        2.12 流式细胞术细胞凋亡检测
        2.13 细胞迁移与细胞侵袭能力检测
        2.14 流式细胞术细胞周期检测
        2.15 数据统计分析
    3. 实验结果
        3.1 miR-let-7b及COL3A1在利多卡因和右美托咪定联合给药处理的PC12中的表达情况
        3.2 验证miR-let-7b对COL3A1的调控作用
        3.3 右美托咪定对利多卡因诱导的PC12细胞毒性的保护作用的分子机制研究
    4. 讨论
第四部分 结论
参考文献
在学期间发表论文
致谢



本文编号：3805887