LncRNA DANCR抑制骨关节炎软骨细胞凋亡及机制研究

发布时间：2024-03-02 12:13

　　目的研究lncRNA DANCR在骨关节炎中的表达水平变化,探究其可能参与骨关节炎发生发展中的作用及机制。方法取膝关节骨关节炎患者的内侧髁关节软骨作为实验组,取股骨颈骨折患者的股骨头软骨作为对照组,体外qRT-PCR检测DANCR在骨关节炎中的表达水平变化;通过Anenexin V-FITC/PI细胞凋亡检测、流式细胞分析技术确定DANCR是否可抑制骨关节炎软骨细胞凋亡;通过基因芯片、starBase v2.0生物信息学数据库预测DANCR的目标miRNA,进行双荧光素酶报告基因实验、RIP实验、qRT-PCR验证;通过TargetScan等生物信息学数据库预测目标miRNA的靶基因,进行双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR、Western Blot验证miRNA是否调控靶基因的表达;通过相关性分析、qRT-PCR、Western Blot验证DANCR能否调控靶基因的表达,并且验证目标miRNA能否阻断这种调控作用。结果(1)qRT-PCR显示DANCR表达水平在人OA软骨细胞中较正常软骨细胞中表达上调;(2)Anenexin V-FITC/PI细胞凋亡检测、流式细胞分析显示DAN...

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图1qRT-PCR显示DANCR在OA中表达增高

图1qRT-PCR显示DANCR在OA中表达增高:通过qRT-PCR检测正常软骨组织和OA软骨组织标本中DANCR的ANCR能够抑制OA软骨细胞凋亡进一步揭示DANCR对OA软骨细胞的影响，使用细胞转DANCR在软骨细胞中的表达（图2....

图2DANCR抑制剂增加OA软骨细胞凋亡（A）:转染DANCR抑制剂后的OA软骨细胞中DANCR相对表达量；（B）：通过流式细胞

图2DANCR抑制剂增加OA软骨细胞凋亡（A）:转染DANCR抑制剂后的OA软骨细胞中DANCR相对表达量；（B）：技术检测DANCR抑制剂对OA软骨细胞凋亡的影响。3miR-216a-5p是DANCR的直接靶点lncRNA能够在染色质重组....

图3OA软骨细胞中DANCR直接结合miR-216a-5p（A）：starBasev2.0数据库显示miR-216a-5p与DANCR的结合位点；（B）：双荧光素酶报告基因显示miR-216a-5pmimics降低DANCR-WT的荧光素酶活性；（C）：RIP实验检测DANCR和miR-216a-5p之间的相互作用；（D）：DANCR抑制剂增加miR-216a-5p的相对表

南京医科大学硕士学位论表达变化。qRT-PCR结果证实了我们的猜想，在OA软骨细胞中miR-216a-5表达降低（图3E）。那么DANCR的升高与miR-216a-5p的降低是一种什么关我们进行了数据分析，得出一条近似的线性关系（图3F）。以上这些结果共同明....

图4DANCR通过miR-216a-5p调控OA软骨细胞凋亡

量；（E）：OA软骨细胞中miR-216a-5p的表达较正常细胞显著降低；（F）：中DANCR与miR-216a-5p的表达成负相关关系，*p<0.05。DANCR通过miR-216a-5p调控OA软骨细胞凋亡miR-216a-5p是DANCR的直....

本文编号：3916842