ZHX3基因沉默对BMSCs中smad3、smad4、RUNX2表达的影响

发布时间：2017-05-25 05:02

  本文关键词：ZHX3基因沉默对BMSCs中smad3、smad4、RUNX2表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨锌指蛋白和同源框3(zinc fingers and homeoboxes 3,ZHX3)基因沉默后骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中smad3、smad4、RUNX相关基因2(RUNX2)表达的变化。方法复苏培养BMSCs,构建ZHX3干扰的慢病毒载体并包装获得重组病毒颗粒,转染大鼠BMSCs作为ZHX3沉默组,同时设空载病毒转染BMSCs作为载体对照组及不施加任何处理因素的BMSCs当做空白对照组。荧光显微镜下计算细胞转染率并通过免疫印迹技术观察转染是否成功;采用碱性磷酸酶和茜素红染色检测各组成骨诱导后细胞的成骨能力;通过免疫细胞化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默后smad3、smad4、RUNX2表达趋势的变化。结果(1)BMSCs转染后,荧光显微镜下可观察到ZHX3沉默组和载体对照组呈现明显的绿色荧光,而空白对照组未见荧光;免疫印迹结果显示沉默组ZHX3基因的表达水平显著低于两个对照组。(2)空白对照组,载体对照组,ZHX3沉默组均可见碱性磷酸酶阳性表达的细胞及矿化结节,但后者数量均小于前两者。(3)免疫荧光结果显示,smad3、smad4的阳性表达主要定位于细胞核和细胞质,而RUNX2主要定位于细胞核。3组细胞均观察到阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度没有显著差异,但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于两个对照组。(4)免疫印迹方法检测smad3、smad4、RUNX2的条带在空白对照组和载体对照组中没有显著差异,但两组均显著高于ZHX3沉默组(P0.05)。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。
【关键词】：锌指蛋白和同源框3 基因沉默 骨髓间充质干细胞 smad3 smad4 RUNX相关基因2
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R68
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-8
• 英文缩略语8-9
• 前言9-10
• 实验材料与方法10-15
• 结果15-22
• 讨论22-25
• 结论25-27
• 本研究创新性的自我评价27-28
• 参考文献28-31
• 附录31-41
• 一、文献综述 间充质干细胞成骨相关通路的研究进展31-38
• 参考文献35-38
• 二、在学期间科研成绩38-39
• 三、致谢39-40
• 四、个人简介40-41

【参考文献】

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本文编号：392735